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Zhejiang Daxue xuebao. Lixue ban, 2003 从江浙蝮蛇毒腺中抽提总RNA,RT-PCR进行体外扩增,获得江浙蝮蛇蛇毒蛋白C激活因子基因,克隆至pGEx-5x-3载体中.对3个重组克隆分别作DNA全序列分析,通过遗传密码推导出相应的氨基酸序列.与其它已知的丝氨酸蛋白酶型蛇毒蛋白的氨基酸作比较,其中许多位置上氨基酸有很强的同源性.该基因的成功克隆,不仅推导出江浙蝮蛇蛇毒蛋白C激活因子的蛋白质序列,也为进一步开展江浙蝮蛇蛇毒蛋白C激活因子蛋白质工程的研究工作打下良好的基础.
WANGYun-gui(王云贵) +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】扩增日本血吸虫26 ku 谷胱甘肽硫-转移酶(Sj26GST)基因片段, 构建其重组原核载体, 以研制SjGST 重 组克隆。【方法】根据已知基因序列设计一对引物, 运用RT-PCR 技术扩增Sj26GST 目的基因cDNA 片段, 将其克隆到pBluescript( KS)质粒中, 并经酶切、PCR 和测序鉴定。【结果】获得GS T-pBluescript(KS)重组克隆。【结论】本实验获得Sj26GST 重 组克隆, 为进一步研制基因工程蛋白疫苗作准备。
李 焱 +7 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2001 【目的】用RT-PCR 法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因全序列, 并建立优化方法。【方法】 从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA , 自行设计引物, 采用两步RT-PCR 法扩增出长约1 550 bp 的基因片断, 凝胶回收后与高 效克隆PCR 产物的新型载体T-载体连接, 并转化入大肠杆菌, 通过蓝白斑反应筛选出重组体, 质粒提取后进行重组体的酶切 鉴定及基因测序。【结果】BamH Ⅰ 和Hin dⅢ 酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接, 基因测序证实了所克隆的 ...
刘 军 +3 more
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Zhejiang Daxue xuebao. Lixue ban, 2007 抽提小鼠R5杂交瘤细胞的mRNA，逆转录成cDNA，扩增出R5单抗的轻重链基因.分析克隆到的轻重链基因的序列信息，得到互补决定区(CDR)序列信息.构建真核表达质粒并在真核细胞中表达.采用互补决定区移植（CDR-grafting）的方法人源化鼠源单抗R5基因.先从人种系(germline)抗体基因片段中选出和克隆到的小鼠R5抗体基因具有相同互补决定区正则结构类型(CDR canonical structure class)的片段，合成寡核苷酸并采用PCR重叠延伸(overlap extension ...
YUJun-ming(余君铭) +1 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 [目的]克隆健康人苯丙氨酸羟化酶基因全长cDNA序列,构建并鉴定其原核表达质粒pTrcHisB/PAH。[方法]采用RT-PCR方法从人肝组织中扩增PAH基因全长cDNA,T/A克隆到pMD18-T载体中,双酶切后将cDA亚克隆入pTrcHisB载体,构建pTrcHisB/PAH质粒,经限制性内切酶鉴定并测序。[结果]人PAH基因cDNA正确克隆入pTrcHisB表达载体,与Genebank中PAH基因序列一致。[结论]成功构建pTrcHisB/PAH表达质粒 ...
张志 +8 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 制备从尖吻蝮蛇蛇毒中分离的纤溶因子的单克隆抗体, 为克隆基因提供特异性的探针。方法: 将纤溶因 子免疫 Balb/C 小鼠,取脾细胞与 SP 2/0 骨髓瘤细胞融合, 筛选稳定分泌抗体的细胞株。采用血纤维蛋白平板法,观察单克隆 抗体能否抑制纤溶因子的纤溶作用。结果: 获得 2 株稳定分泌单克隆抗体的细胞株。 Western 印迹显示该单克隆抗体能特异 地与纤溶因子结合,与其它蛋白无交叉反应, 此外,这 2株单克隆抗体具有抑制纤溶因子溶解人血纤维蛋白的作用。结论: 这 2 ...
邱鹏新 黎明涛 苏兴文 陈家树 颜光美
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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B（MCSB）中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM ...
卢燕茹, 江振友
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】研究大鼠急性局灶性脑缺血时缺血组织与非缺血组织中基因表达的差异,克隆出与脑缺血相关的基因。【方法】应用荧光差异显示PCR(FDDPCR)从同一例大鼠大脑皮层缺血组织和非缺血组织中筛选出有表达差异的基因片段,经反向Northernblot杂交,将杂交阳性的片段且经RT-PCR反复验证,选取差异明显的片段进行克隆测序;经生物信息学分析处理,选取同源性低的EST片段R6,利用cDNA5’端快速扩增PCR(5’RACE法)进行基因全长的克隆。【结果】利用5’RACE法成功地克隆EST片段R6至编码区 ...
臧林泉
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转移力不同的肺癌克隆细胞中nm23-H1基因产物NDPK 的表达
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】比较转移抑制基因nm23-H1 表达产物核苷酸二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase , NDPK)在转移力 不同的肺癌克隆株中的表达。【方法】通过单细胞克隆技术及裸鼠接种筛选出高转移及低转移的人肺巨细胞癌克隆细胞株及 高转移的人肺腺癌克隆细胞株, 用LSAB 免疫组化法检测nm23-H1 基因产物NDPK 的表达。【结果】NDPK 在高转移及低转 移的人肺巨细胞癌克隆细胞移植瘤及转移瘤中均有表达, 高转移株的阳性细胞数目及强度均高于低转移株和裸鼠正常肺组
张 彬 +3 more
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