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, 2002 作者通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)Ti质粒介导和基因枪法 ,将含抗除草剂Bar基因的植物表达载体 ,导入小麦幼穗和幼胚愈伤组织 .X Gluc染色检查表达载体中GUS标记基因的瞬时表达 ,并在含有除草剂Basta的培养基上进行多步筛选 .以愈伤组织为单位 ,统计GUS表达阳性频率和转化体的分化频率 .结果表明 :基因枪轰击法的平均转化率高于农杆菌导入法 ;幼穗作为受体的转化率高于幼胚 ;干燥处理有利于提高根癌农杆菌对小麦愈伤受体的浸染力
杨晓娟,邓光兵,余懋群, 余懋群
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四川大学学报. 自然科学版, 2013 生物信息学分析推测了水稻OsHAD1基因属于HAD(haloacid dehalogenase)超级家族水解酶.为研究其功能,本实验设计构建了OsHAD1-RNAi载体,通过农杆菌介导的方法转化水稻,成功获得了转基因植株.结果表明,转基因植株与野生型(日本晴)相比,转基因植株从T0代到T2代结实率均有20%～50%的降低;实时荧光定量PCR分析显示,T2代独立转基因植株中OsHAD1基因的表达量均有50%以上的下调;花粉染色结果显示,转基因植株花粉染色异常,败育率高,平均败育率达71.19 ...
任鹏飞 +6 more
doaj
, 2003 转基因动物整合位点克隆及相关序列特征研究是探索外源基因整合机制和整合稳定性的重要手段。转基因整合位点序列的克隆方法主要有:个体基因组文库筛选法、反向PCR法、热不对称交互式PCR法和质粒回收法。4种方法各有优缺点,可根据不同条件选用。克隆到的整合位点序列表明 ...
吴波,朱作言
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的研究siRNA对人胶质瘤U251细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入U251细胞;用半定量RT-PCR检测siRNA MDM2对MDM2基因表达的抑制作用;并用MTT法检测siRNA MDM2对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染siRNA MDM2的细胞的MDM2基因表达分别下调到对照组的31.61%和40.18%;转染阴性对照质粒的MDM2基因没有明显改变。MTT结果表明转染siRNA ...
张舵舵 +4 more
doaj
, 2010 研究采用草鱼H1基因启动子,以草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)外衣壳蛋白VP7基因为靶基因,以增强型绿色荧光蛋白(eGFP)为报告基因,构建了3个小发卡RNA(shRNA)表达载体pH1siGCRV(x)-CMVeGFP。CIK细胞感染实验表明,pH1siGCRV2-CMVeGFP具有较高的病毒抑制作用。通过显微注射将pH1siGCRV2-CMVeGFP导入稀有鮈鲫(Gobiocypris rarus)受精卵,获得转基因稀有鮈鲫P0代群体。转基因稀有鮈鲫攻毒实验显示 ...
陈芸 +5 more
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, 2001 本文共五章，包括以下主要研究内容：用稀有鮈鲫和草鱼发展和优化一种简便易行的转基因方法，即电脉冲-精子介导转基因法；研制转人类乳铁收白基因草鱼，并在其鱼种阶段检测其抗病力：以稀有鮈鲫为实验材料，进一步研究电脉冲-精子介导转基因法的机制。第一章：综述近年在鱼类转基因方法上的研究进展，各种转基因方法的优势与不足，人类乳铁蛋白hLF的生理功能的研究进展，草鱼出血病的研究现状。第二章：重组质粒pCAhLFc的构建，将我国鲤科“全鱼”重组质粒，即草鱼生长激素cDNA与鲤鱼的&beta ...
钟家玉
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Linchuang shenzangbing zazhi, 2014 目的 构建重组人Orail基因真核表达载体,观察其在小鼠肾小球足细胞株（MPC5）中的表达。方法 根据GenBank数据库检索到的人Orail基因序列,人工合成法合成Orail基因编码区（coding sequence,CDS）全长序列,克隆至质粒表达载体PG-CMV-IRES-EGFP,构建重组质粒载体PG-CMV-Orail,通过PCR、双酶切及基因测序等方法进行鉴定;以脂质体转染法将重组质粒转染至MPC5细胞,应用荧光显微镜观察绿色荧光检测转染效率,RT-PCR、Western ...
魏冬月
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1998 目的: 研究小鼠 B7 基因转染对小鼠肝癌细胞 Hepal-6 细胞株细胞形态、生长速度及致瘤性的影响。方法: 用逆转录病毒载体,将 小鼠B7 基因导入小鼠肝癌细胞 Hepal-6 细胞株中,经G418 筛选,获得高表达 B7分子的阳性细胞克隆,采用CTLA-4Ig 的间接免疫荧光法检测 B7 分子的表达情况,并观察了B7 基因转染对细胞形态、生长速度及致瘤性的影响。结果:①亲本小鼠肝癌细胞株 Hepal-6 不表达 B7 分子,转 染 B7 基因的 Hepal-6 细胞高表达 B7 分子;②转染 B7
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腺病毒介导的BMP-2基因转染骨髓基质干细胞及种植异种骨支架的体外观察
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 用人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 （Ad BMP 2 ）转染的兔骨髓基质干细胞 （BMSC） ,种植BCB（去抗原牛松质骨 ）支架体外构建组织工程骨。方法 蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,ALP活性检测分析基因转染对细胞分化的影响。然后将转染后细胞接种到BCB支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 转染后 ,BMSC表达BMP 2 ,ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 Ad BMP 2可高效转染BM SC ,且促进细胞分化 ...
景元海 +4 more
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