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多药耐药基因转染人骨髓间充质干细胞及对其化疗保护作用的实验研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的探讨逆转录病毒介导多药耐药基因（mdr1）体外转染人骨髓间充质干细胞（MSCs）能否提高其对化疗药物的耐受性。方法采用percoll密度梯度离心法自骨髓中分离MSC并进行纯化和扩增;脂质体转染法将携带有mdr1基因的逆转录病毒载体导入293T包装细胞,获得的病毒上清感染MSC,流式细胞术测定mdr1基因编码产物P-糖蛋白（P-g170）的表达水平;罗丹明（Rh123）排泌试验检测P-g170的功能活性;MTT法测定转染MSC对化疗药物耐受性。结果mdr1基因导入骨髓MSC后稳定表达P ...
叶明珠, 韩丽英, 岳鑫, 李荷莲
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建人Shh基因过表达慢病毒载体,转染293T细胞,建立稳定转染人Shh基因的293T的细胞系。方法设计引物引入AgeⅠ酶切位点,使用PCR方法从质粒中扩增Shh基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化。将AgeⅠ内切酶消化后目的片段交换连接入pGC-FU载体,构建Shh慢病毒表达载体pGC-FU-Shh。酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Shh与携带GFP的慢病毒辅助包装载体共转染293T细胞,荧光显微镜检测慢病毒载体转染细胞的结果,重组质粒pGC-FU-Shh的测序,Western
边学海 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建含基因NLRC3的重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3。方法利用基因重组技术将NLRC3基因插入到真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA中,经酶切,PCR,测序及Western确定重组体质粒构建成功并转染。结果重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3构建成功。并将重组体转染至hUMSC细胞中并进行单克隆筛选扩增。结论重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3构建成功,并成功转染到hUMSC中,为下一步研究NLRC3的转染研究奠定基础。
宛莹, 张世冬, 梁爽, 聂德志
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的研究DPC4基因转染对结肠癌SW480细胞的影响。方法建了表达DPC4基因的逆转录病毒pLXSN载体,转染SW480细胞和未转染的SW480细胞为对照。Western鉴定DPC4蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖率。结果发现SW480/DPC4细胞较SW480/pLXSN、SW480/-细胞,生长明显减缓,经统计有显著差异 ...
谢忠士, 谭岩, 宋燕
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的应用胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）基因转染雪旺氏细胞,观察GDNF基因在雪旺氏细胞内的表达效果,以及对雪旺氏细胞的营养作用。方法将雪旺氏细胞分为空白对照组、载体组、空载体组,通过阳离子脂质体介导,将GDNF基因转染雪旺氏细胞。用细胞增殖实验（MTT）、免疫组化、流式细胞仪观察在24h、48h、72h各组转染后对细胞的营养作用。结果在载体组细胞的生长状况较其他两组增殖良好。免疫组化可见GDNF在载体组细胞内呈现高表达。流式细胞仪观察基因转染后对雪旺氏细胞有明显的营养作用 ...
杜文彦 +3 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的探讨siRNA对人肝癌HepG2细胞MDM2基因表达的抑制作用及对增殖的影响。方法体外合成针对MDM2基因的siRNA质粒,转染HepG2细胞株;应用RT-PCR和western blot方法检测siRNA对MDM2和P53基因和蛋白表达的影响,并用MTT法检测siRNA对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期。结果和空白组比转染siMDM2-1,2的HepG2细胞的MDM2基因和蛋白表达减低,而P53基因和蛋白表达增加。阴性对照质粒组的基因表达未见明显改变。转染siRNA ...
赵燕颖 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的制备YWHAZ重组腺病毒及逆转录病毒,在293T细胞中验证基因表达情况。方法将YWHAZ基因分别克隆至腺病毒穿梭质粒pacAd5CMV-IRES-GFP及逆转录病毒质粒pLXSN-IRES-GFP,并用酶切鉴定、PCR及测序验证后分别转染至HEK 293T及Ampho293细胞,构建重组腺病毒及逆转录病毒。重组病毒分别感染293T细胞,观察荧光验证病毒侵染效果,RT-PCR检测YWHAZ基因表达情况。结果 PCR、酶切鉴定及测序分析,重组腺病毒及逆转录病毒构建正确 ...
王雅雯, 于宏, 王世宝, 黄映辉
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的研究siRNA对人胶质瘤U251细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入U251细胞;用半定量RT-PCR检测siRNA MDM2对MDM2基因表达的抑制作用;并用MTT法检测siRNA MDM2对细胞增殖抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染siRNA MDM2的细胞的MDM2基因表达分别下调到对照组的31.61%和40.18%;转染阴性对照质粒的MDM2基因没有明显改变。MTT结果表明转染siRNA ...
张舵舵 +4 more
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Linchuang shenzangbing zazhi, 2014 目的 构建重组人Orail基因真核表达载体,观察其在小鼠肾小球足细胞株（MPC5）中的表达。方法 根据GenBank数据库检索到的人Orail基因序列,人工合成法合成Orail基因编码区（coding sequence,CDS）全长序列,克隆至质粒表达载体PG-CMV-IRES-EGFP,构建重组质粒载体PG-CMV-Orail,通过PCR、双酶切及基因测序等方法进行鉴定;以脂质体转染法将重组质粒转染至MPC5细胞,应用荧光显微镜观察绿色荧光检测转染效率,RT-PCR、Western ...
魏冬月
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腺病毒介导的BMP-2基因转染骨髓基质干细胞及种植异种骨支架的体外观察
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 用人骨形态发生蛋白 2腺病毒表达载体 （Ad BMP 2 ）转染的兔骨髓基质干细胞 （BMSC） ,种植BCB（去抗原牛松质骨 ）支架体外构建组织工程骨。方法 蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,ALP活性检测分析基因转染对细胞分化的影响。然后将转染后细胞接种到BCB支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 转染后 ,BMSC表达BMP 2 ,ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 Ad BMP 2可高效转染BM SC ,且促进细胞分化 ...
景元海 +4 more
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