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p21WAF1/GIP1基因转染人宫颈癌Hela细胞对顺铂敏感性的影响
目的探讨转染p21WAF1/CIP1基因(p21基因),对宫颈癌Hela细胞生长抑制作用及p21基因转染Hela细胞对顺铂敏感性的影响。方法应用脂质体转染技术,将质粒pcDNA3转入人宫颈癌Hela细胞中,经G418筛选,转染阳性克隆细胞连续传代培养,并采用中性红摄入法测定顺铂对p21基因转染人宫颈癌Hela细胞增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期变化。结果经G418筛选,Hela细胞全部死亡,转染质粒pcDNA3的Hela细胞存活,并可连续传代。p21基因转染后,细胞生长明显受到抑制 ...
曹岩, 黄颖, 郑永晨
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【目的】为替换中枢神经损伤后死亡的神经元提供方便追踪观察的神经前体细胞。【方法】应用含碱性成纤维生 长因子(bFGF)的无血清培养技术, 从新生大鼠海马组织分离培养神经前体细胞, 并借助免疫组织化学技术检测这些细胞巢蛋 白(nestin)的表达以及细胞分化后神经丝蛋白(NF)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。采用磷酸钙法将绿色荧光蛋白 (GFP)基因转染目的细胞内。【结果】从海马组织分离的细胞具有分裂能力, 能表达nestin 。分化后一些细胞能表达NF, 而另 一些细胞则表达GFAP ...
庄 菁, 罗超权
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重组pDC316-MCMV/hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能 [PDF]
【目的】克隆人的钠/碘同向转运体(hNIS)基因可编码序列,并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(又称Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上,获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV/hNIS。采用脂质体转染的方法,把pDC316-MCMV/hNIS重组质粒(实验组)或pDC316空质粒(对照组)分别导人到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、
周嘉嘉 +5 more
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目的探讨p16基因转染对大肠癌细胞生长及对放射敏感性的作用。方法以脂质体介导外源性P16基因转染大肠癌SWWC细胞系,照射后MTT法测定OD值,计算细胞生长抑制率。结果p16基因转染大肠癌SWWC细胞发生周期阻滞,照射后转染组细胞生长抑制率增加,与对照组有明显差异。结论p16基因转染对大肠癌SWWC细胞具有明显抑制作用,可提高大肠癌细胞对放射的敏感性。
梁显军 +4 more
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Preparation and Characterization of Gelatin-Siloxane Nanoparticles as Gene Delivery System [PDF]
基因治疗的主要目的是研制安全有效的基因转染载体。在基因转染载体中,非病毒载体以其低毒性、低免疫原性、低致瘤性及易于制备等优点具有良好的应用前景。本文以新型有机-无机杂化材料——明胶-硅氧烷纳米颗粒作为基础,探讨了此种材料的合成机制,将其应用于基因治疗,并以活性多肽修饰表面增强功能性。取得的主要成果有:1.以明胶、GPSM和氨水作为反应物,或以明胶、GPSM和APTMS作为反应物,通过溶胶-凝胶法,制得两种阳离子明胶-硅氧烷颗粒。探讨了两种纳米颗粒的合成机制,探索了一种全新材料的合成和表征方法。2 ...
赵阳
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Effect of Exogenous RGS16 Gene Transfection on Growth of Glioma Cell Line C6 [PDF]
背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线 ...
张丰(第四军医大学西京医院病理科) +5 more
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【目的】 研究Bcl-xl基因对成人神经母细胞廇SH-SY5Y细胞毒性的影响.【方法】 将构建好的Bcl-xl基因重组真核表达载体pIRES2-EGFP/Bcl-xl转染SH-SY5Y细胞,并分为正常组、pIRES2-EGFP空质粒转染组、pIRES2-EGFP/Bcl-xl质粒转染组,利用凋亡诱导剂硝普钠(50 μmol/L)诱导各组细胞凋亡,行Hoechst33258细胞染色对比观察各组细胞凋亡情况,通过MTT法分析各组细胞存活率?RT-PCR与Western blotting检测转染后Bcl ...
杨炼红 +5 more
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目的探讨肿瘤转移抑制基因KiSS-1对膀胱癌细胞T24的生物学影响。方法将构建好的含771 bp大小的基因片段的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/KiSS-1及空载体pcDNA3.1(+)用阳离子脂质体介导采用基因转染技术转染膀胱癌细胞T24,观察KiSS-1mRNA的表达、细胞生长能力、增殖情况及细胞侵袭力的变化。结果pcDNA3.1(+)/KiSS-1成功转染T24细胞,KiSS-1 mRNA表达阳性,而正常细胞和空载体组为阴性;转染目的基因后细胞生长曲线 ...
袁子杰, 杨杰
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Basic Study on Application of Gene Carrier in Gene Therapeutic Drugs [PDF]
根据自主知识产权的专利工艺路线,合成具有分支结构、分子量30kD的阳离子聚合物,以此为基础构建sofast基因载体,用于大分子核酸的体外和体内的基因传递。通过sofast/DNA复合物形成、粒径、zeta电位、抗核酸酶能力、酸碱缓冲能力、结合核酸能力,以及基因融合肽diINF-7和工作介质盐浓度的影响等分析,对sofast基因载体的转染机制做了初步的探讨。在体外试验中,采用sofast基因载体将质粒pEGFPN1、pCMV-lacZ和pGL3分别转染到HEK297细胞,通过所表达的绿色荧光蛋白、b ...
杨天赐
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