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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的研制高效表达型T载体用于基因的表达及蛋白功能分析。方法限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化。将增强绿色荧光蛋白基因（EGFP）和中国旱獭α干扰素基因（cwIFNA5）分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭α干扰素的生物学活性。结果成功构建了表达型T载体 ...
卢银平, 祝建芳, 刘朝, 董继华
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2018 目的构建含EGFP标签的人β-神经生长因子（hβ-NGF）的真核表达载体,观察和分析其在HEK293细胞中的定位,为后续基因转移实验奠定基础。方法PCR扩增hβ-NGF基因编码框,连接到pEGFP-N1载体,将HEK293细胞分为对照组（不转染）、空载组（转染pEGFP-N1质粒）和实验组（转染pEGFP-N1-hβ-NGF质粒）,后两组采用脂质体法转染,24h后荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达及细胞定位,通过蛋白序列数据库和生物信息学软件进一步分析亚细胞定位。结果经双酶切和测序鉴定,pEGFP-N1 ...
杨智 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建人PTEN绿色荧光蛋白真核表达载体并进行鉴定。方法参照PTEN基因全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点。从正常人胎盘组织中提取mRNA作为模板合成第一链,并扩增目的基因序列片段,经双酶切后定向克隆至绿色荧光蛋白真核表达载体pEGFP-C1中,筛选阳性重组质粒,分别经双酶切、测序法对重组质粒进行鉴定。结果双酶切和特异PCR结果表明克隆的基因片段约1.2 kb;测序法进一步证实该基因为PTEN编码基因,经NCBIBLAST分析与Gene Bank中基因序列完全相同 ...
武鸿斌 +4 more
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戊型肝炎病毒衣壳蛋白结合CYP 2A6并降低其底物催化能力 [PDF]
, 2009 肝炎病毒的感染常常导致人体肝脏代谢能力变化,研究表明甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus,HAV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)和丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)的感染都会影响肝细胞对药物的代谢能力。在本研究中,通过酵母双杂交系统在人肝cDNA文库中筛选与戊型肝炎病毒重组衣壳蛋白E2结合的蛋白,发现了与细胞色素P450 2A6(CYP2A6)部分片段高度同源的蛋白序列。通过pull-down ...
何水珍 +8 more
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Preliminary Studies on Regulation of JAK-STAT3 Signaling Pathway by Varicella-zoster Virus Immediate-early Protein 62 [PDF]
, 2017 水痘-带状疱疹病毒（Varicella-zosterVirus，VZV）可引起水痘（Varicella/chickenpox）和带状疱疹（Herpeszoster）两种疾病。VZV初次感染人体后会引发水痘，随后病毒沿着神经轴突逆向运输至感觉神经中枢并建立长期潜伏，潜伏的部位主要包括脊髓背根神经节。随着年老、免疫抑制或劳累等情况，潜伏的VZV被重新激活，可引发较为常见的神经皮肤性疾病带状疱疹，通常伴有较为严重的后遗神经痛，影响患者的生活质量。目前缺乏针对水痘以及带状疱疹的特效药 ...
付文锟
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建趋化因子受体4（CXCR4）的特异RNA干扰载体。方法在GenBank数据库查询CXCR4基因的登陆号为NM-003467。使用Invitrogen公司的在线设计软件Invitrogen′s RNAi Designer,设计miR RNAi,选择713这个位点设计成相应的Oligo DNA,退火DNA oligos生成双链oligos,应用T4DNA连接酶连接双链oligos与表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR。酶切鉴定和测序鉴定 ...
王海涛, 金宏林, 王莹, 金春顺
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Zhongguo shiyan zhenduanxue目的 构建带有FLAG标签的BPIFC基因真核表达载体，建立稳定转染BPIFC基因的HaCaT细胞系。方法 设计引物通过PCR扩增出BPIFC基因片段，利用DNA重组技术将该基因片段定向插入pcDNA3.1-flag-N真核表达载体中，并对重组质粒进行双酶切及DNA测序鉴定。验证正确的重组质粒通过PI Max线性转染的方法转染至HaCaT细胞，通过G418筛选建立BPIFC稳定转染的HaCaT细胞系，并通过RT-PCR法和Western-blot法分别测定BPIFC mRNA和蛋白的表达量。结果 ...
陆娇娇 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建靶向EZH2基因的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术探索EZH2基因的作用的研究做准备。方法根据EZH2 mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入pGenesil-2载体,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体中,经测序证明与设计相同。结论成功构建靶向EZH2基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究EZH2基因在肿瘤细胞中的作用机制及后续的体内外RNAi实验研究奠定了基础。
卢绩 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索共刺激分子 B7-1 增强 HBsAg 真核表达载体基因免疫的效果,并用于消除乙肝免疫耐受。【方法】 用高保真 PCR 法扩增目的基因片段 B7-1 及带接头和启动子的 IRES-HBs 基因片段,亚克隆到 pBluescript KS+载体中测序,再 克隆到逆转录病毒载体 PLXSN 中。【结果】所扩增的目的基因片段经测序证实, 未发现序列有改变。先将 B7-1 通过 EcoR Ⅰ 、Xho Ⅰ插入 plxsn 中,构建成 plxsn-B7-1, 再用 Xho Ⅰ 、 BamHⅠ将 ...
周 智 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2001 【目的】构建人Ⅰ 型基质金属蛋白酶基因(MMP1)真核表达重组质粒, 并进行序列分析。【方法】用逆转录聚 合酶链反应扩增人Ⅰ 型基质金属胶原酶cDNA, 获得目的基因片段(1 407 bp)连接至pcDNA3 载体, 并转化大肠杆菌DH5α, 筛 选阳性克隆并鉴定, 并对片断全长进行DNA 序列测定。【结果】所克隆人Ⅰ 型基质金属胶原酶cDNA, 含全长MMP1 编码区, 与GeneBank 公布序列比较, 仅1 318 位的胞苷酸C 突变为腺苷酸A。并成功构建了含有MMP1 ...
彭 慧, 汪 谦, 黄洁夫
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