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表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定
野生动物学报, 2021 为构建能够表达大熊猫源犬瘟热病毒（CDV）分离株giant panda/SX/2014 H蛋白的复制缺陷型重组腺病毒，利用反转录聚合酶链反应（RTPCR）扩增株giant panda/SX/2014 H基因，通过TOPO连接克隆至入门载体pENTR/DTOPO，得到重组入门质粒pENTR/DTOPOCDVH，然后与腺病毒骨架载体pAd/CMV/V5DEST进行LR重组，获得重组质粒pAdCDVH；重组质粒用PacⅠ酶切线性化后转染293A细胞，获得重组腺病毒rAdCDVH ...
陈廷炜 1 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化 ...
姜楠 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的利用小鼠盐诱导基因（Salt induced kinase2,SIK2）的重组腺病毒载体,研究脂肪细胞中SIK2的表达。方法重组小鼠SIK2基因腺病毒载体经脂质体转染293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3-L1脂肪细胞,通过real-time PCR及免疫印迹法检测鼠SIK2在3T3-L1脂肪细胞中的表达。结果纯化后的病毒滴度达0.5×1012病毒颗粒/ml。重组腺病毒载体能在成熟3T3-L1脂肪细胞中高表达鼠SIK2 ...
杜静 +5 more
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SIK2 shRNA重组腺病毒载体构建及其在3T3-L1脂肪细胞的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建特异性小鼠盐诱导基因（Salt induced kinase2,SIK2）的shRNA腺病毒载体,干扰脂肪细胞中SIK2的表达。方法设计3对靶向SIK2的shRNA,插入穿梭质粒pENTR/U6载体,转染3T3-L1脂肪细胞,通过Real-timePCR方法筛选最佳沉默SIK2效果的穿梭质粒,经腺病毒同源重组后,重组小鼠SIK2shRNA腺病毒载体经脂质体转染HEK293A细胞,在细胞内包装获得腺病毒颗粒AdV-SIK2-shRNA,并进行大量扩增和纯化。纯化的腺病毒感染成熟的3T3 ...
杜静 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的制备YWHAZ重组腺病毒及逆转录病毒,在293T细胞中验证基因表达情况。方法将YWHAZ基因分别克隆至腺病毒穿梭质粒pacAd5CMV-IRES-GFP及逆转录病毒质粒pLXSN-IRES-GFP,并用酶切鉴定、PCR及测序验证后分别转染至HEK 293T及Ampho293细胞,构建重组腺病毒及逆转录病毒。重组病毒分别感染293T细胞,观察荧光验证病毒侵染效果,RT-PCR检测YWHAZ基因表达情况。结果 PCR、酶切鉴定及测序分析,重组腺病毒及逆转录病毒构建正确 ...
王雅雯, 于宏, 王世宝, 黄映辉
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建含鼠LINGO-1短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）的复制缺陷型腺病毒载体。方法通过PCR法将带有LINGO-1 shRNA序列构建至U6启动子（U6sh LINGO-1）下游,与T载体连接,将质粒转化入大肠杆菌。将U6sh LINGO-1连到穿梭质粒pDC316上,与腺病毒基因组质粒pBHGlox△E1、3Cre共转染293T细胞,得到重组腺病毒载体（rAd LINGO-1）。经PCR鉴定正确后,进行扩增、纯化、滴度测定及感染性鉴定。结果PCR法得到U6sh ...
高峰, 孙红辉, 杨有庚
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2005 【目的】构建人神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)受体(即酪氨酸蛋白激酶受体C, tyrosine protein kinase C, TrkC)基因重组的腺病毒表达载体。【方法】从人脑组织mRNA 中扩增TrkC 基因全长cDNA, 定向克隆于穿梭质粒pShuttle 中, 获得一个带有CMV 启动子的表达盒。再将表达盒与腺病毒骨架DNA ( Adeno-X viral DNA) 体外连接, 形成重组腺病毒质粒(pAd-TrkC)。用pAd-TrkC 转染人胚肾293 ...
王俊梅 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2023 目的 对腺相关病毒衣壳进行合理设计改造，从而提高腺相关病毒转导脑肿瘤细胞的效率。方法 通过在AAV5的衣壳蛋白Cap的氨基酸N573后插入一段寡肽GIVADNLNL以替换Q574到T578之间的蛋白序列QSSTT,同时引入两个点突变S2A和T711S得到AAVX01。研究该改造对腺相关病毒产量是否会造成影响；用包装有荧光蛋白报告基因的AAV病毒感染H4及A172细胞系，观察和比较AAVX01与野生AAV5及AAV8的转导效率。结果 通过改造得到新型血清型AAVX01 ...
高腾 +5 more
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重组腺病毒载体携带反义微小RNA-21对膀胱癌细胞生长的作用
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的探讨重组腺病毒载体介导的微小RNA-21（miRNA-21）反义寡核苷酸（ASOND）对人膀胱癌细胞株T24生长的影响。方法构建反向插入miRNA-21基因的重组腺病毒载体（rAV-miRNA-21）,并用反义rAV-miRNA-21转染T24,即病毒载体用药组。采用噻唑蓝（MTT）法和原位末端标记（TUNEL）法检测T24细胞的增殖和凋亡情况。同时设对照组和空病毒组作为对比。结果 rAV-miRNA-21用药组、对照组和空病毒组T24细胞的增殖率分别为（37.1±6.8）%（、95.7±5.8）%（
朱德淳 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 构建人VEGF16 5腺病毒表达载体 ,探讨应用血管内皮生长因子 （VEGF）基因治疗脑梗死的可行性。方法 采用分子克隆技术 ,以质粒hVEGF16 5·SR为模板 ,扩增hVEGF16 5成熟cDNA。经穿梭质粒PShuttle克隆到腺病毒质粒上 ,构成Adeno VEGF16 5腺病毒重组质粒 ,经酶切及测序鉴定正确后 ,包装成为重组Adeno VEGF16 5腺病毒 ,并进行电镜观察及滴度测定。用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达。结果 ...
张海鸥, 吴军, 林凯华, 易黎
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