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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2003 目的 构建含有肝细胞生长因子 （HGF）NK4基因的重组腺病毒载体 ,为应用HGF/NK4进行肿瘤基因治疗奠定实验基础。方法 应用AdEasy腺病毒载体系统 ,将PCR扩增所得的NK4基因片段与穿梭质粒pShuttle CMV进行连接 ,获得重组质粒pShuttle CMV NK4 ,将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ5 183获得重组腺病毒质粒pAdCMV NK4 ,用该质粒转染 2 93细胞包装产生出重组腺病毒rvAdCMV NK4。重组腺病毒分别经电子显微镜技术及RT ...
介建政 +5 more
doaj
FKBP12．6重组腺病毒载体的构建及其心肌细胞感染效率测定
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带FKBP12．6基因的重组腺病毒载体以研究FKBP12．6在心力衰竭时心室肌电重构中的作用。【方法】将平端化的FKBP12．6片段连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV构建重组穿梭质粒pAdTrack／FKBP12．6，用Xho I单酶切进行鉴定。采用电穿孔法将线性化pAdTrack／P12．6转化AdEasier-1细菌。产生重组腺病毒质粒pAdEasy-1／FKBP12．6。采用脂质体介导法用线性化pAdEasy-1／FKBP12．6转染293细胞，从病变的293细胞分离 ...
李德, 伍卫, 周淑娴
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重构腺相关病毒转导 PDX- 1 对 C2C12 分化为胰岛素分泌细胞的作用
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】重构含有 PDX- 1 的腺相关病毒载体 , 将 PDX- 1 转导入 C2C12 细胞 , 观察胰岛素分泌量的改变。【方法】应用 PCR 方法将 PDX- 1 从 pZL1 质粒中克隆出来, 安装到Stratagene 公司的腺相关病毒(AAV Helper- Free System)表达系统中 , 转染 HEK293 细胞 , 培养 72 h, 提取病毒悬液 , 转导 PDX- 1 进入 C2C12 细胞中, 检测细胞培养液中的胰岛素含量。【结果】①用 X- gal 染色系统检测 ...
陈黎红
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的 构建携带HIV 1vpr基因的重组腺病毒 ,为进一步基因治疗的实验研究奠定基础。方法 利用AdEasy 1系统 ,通过含有目的基因片段vpr的穿梭载体pShuttle CMV/vpr和骨架质粒pAdEasy 1在细菌内同源重组的方法构建重组腺病毒质粒pAdCMV/vpr。将重组质粒转染 2 93细胞包装出重组腺病毒rvAdCMV/vpr。利用PCR等方法对重组腺病毒进行鉴定。结果 获得表达vpr蛋白的重组腺病毒。结论 成功构建出携带HIV 1vpr基因的重组腺病毒 ...
孟子辉, 王巍
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索腺病毒载体在基因治疗中的应用及其表达目的抗原的有效性。【方法】用 BamHⅠ 、EcoRⅠ双切 质粒 pBluscript KS+ -HBs, 回收 S 基因片段, 定向克隆插入质粒 pACCMVpL 中相应的酶切位点, 通过快速抽提酶切鉴定筛选 重组质粒。【结果】挑取的 8 个克隆经 BamHⅠ 、EcoRⅠ酶切鉴定, 有 950 bp 的目的基因片段, 证明为重组体。【结论】成功 构建表达 HBsAg 基因的重组腺病毒载体。
周 智 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建携带大鼠脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF）目的基因的复制缺陷型重组腺病毒，并初步检测其体外表达目的基因的能力。【方法】提取大鼠脑组织总RNA，使用RT—PCR方法扩增BDNF目的基因并将其克隆入pMD18-T Simple载体测序，将测序完全正确的BDNF目的基因克隆入pShuttle2中，然后利用体外连接法将BDNF目的基因克隆入Adeno—X^TM腺病毒骨架中。Lipofectamine^TM ...
王鹏 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的包装携带人T细胞转录因子T-bet基因的重组腺病毒,为研究T-bet在人鼻黏膜中作用的分子机制奠定基础。方法采用RT-PCR方法从健康人PBMC中扩增出转录因子T-bet的cDNA序列,构建重组穿梭载体pDC316-T-bet;采用阳离子脂质体介导将重组穿梭载体pDC316 T-bet与pBHGloxΔE1,3C re质粒共转染293细胞,包装出携带T-bet基因的重组腺病毒rAdT-bet,空斑纯化,PCR鉴定阳性rAdT-bet。结果以空斑纯化后的rAdT-bet为模板 ...
孙克巍 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】构建小鼠T-bet基因重组腺病毒载体,为T-bet基因在支气管哮喘治疗中的作用研究提供有效的T-bet生物表达系统。【方法】采用内切酶从质粒T-bet/GFP-RV中切获约1.7kb的小鼠T-betcDNA片段,与穿梭质粒pShuttle连接,再通过稀有酶切位点将含T-betcDNA的表达盒与Adeno-X腺病毒载体骨架连接,构建重组载体pAdeno-T-bet,测序鉴定无错配及插入移位等DNA顺序改变,并转染HEK293细胞,出现CPE后取含病毒上清的细胞培养液抽提病毒DNA行PCR鉴定 ...
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腺病毒载体介导的大鼠DNA 多聚酶β重组体的构建及其在PC12 细胞中的表达
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2005 【目的】为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制，构建其重组腺病毒载体，并在PC12细胞中表达。【方法】RT-PCR获取大鼠DNA多聚酶β(POLβ)的编码序列，TA克隆测序，酶切POLβ基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV，电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。重组腺病毒质粒(pAd-polβ)和Lipofectamine2000转染293细胞，用重组腺病毒感染PC12细胞。【结果】10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ ...
钟建辉
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的研究重组腺病毒载体感染小鼠神经瘤细胞（N2a）的感染效率及重组腺病毒介导的人鞘氨醇激酶-1（sphingosine kinase-1,SPK1）基因在N2a细胞表达特性。方法用流式细胞仪检测感染效率,用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白的表达;用Western blot方法检测SPK1蛋白的表达。结果 N2a细胞的感染效率和绿色荧光蛋白表达量在一定范围内随着病毒感染复数（Multiplicity of infection,MOI）的增加而增高,MOI为100时感染效率达峰值为（99.57±0.133）%
杨阳 +6 more
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