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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后目的基因表达情况及对MSCs增殖分化的影响。【方法】构建含VEGF基因的腺病毒表达载体,利用贴壁法分离培养MSCs后,用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效果和转染率,用免疫组化、Western-Blot和ELISA方法分别检测VEGF基因转染MSCs后VEGF的表达情况。【结果】腺病毒介导的VEGF基因对于MSCs具有很高的转染效率,转染效率与病毒感染复制数(multiplicyties of ...
华平 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2017 基因治疗对常用治疗方法难以解决的单基因疾病、癌症、心血管疾病等往往具有良好的疗效。迄今为止,已有超过2000例的基因治疗应用于临床试验[1],在基因治疗临床试验中超过68%是应用病毒载体。腺相关病毒（AAV）载体由于其基因传递效率高,缺乏致病性和具有良好的安全性而备受青睐[2]。三十多年来,许多应用AAV的基因治疗临床试验取得了成功,rAAV成为人类临床试验的最佳载体之一[3,4,5 ...
张梅, 于英君
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携带人可溶性TRAIL基因的重组腺病毒在肺癌细胞中的转染效率及表达特性研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的研究重组腺病毒感染肺腺癌细胞A549的转染效率及重组腺病毒介导的人可溶性肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（hTRAIL95-281）基因的体外表达。方法用不同感染滴度（MOI）（0-10 000 VP/cell）的重组腺病毒Ad-CMV-EGFP转染A549细胞后48 h收集细胞,经流式细胞仪检测其转染效率,并在共聚焦荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达;用MOI为5 000 VP/cell的Ad-CMV-EGFP感染肿瘤细胞后不同时间（24 h、48 h、72 h和96 h）收集细胞 ...
朴春姬, 田梅, 杨巍, 李修义
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重组腺病毒介导RECK基因在大肠癌细胞中的表达及抑制癌细胞浸润能力的实验研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的 研究重组腺病毒介导RECK基因转染大肠癌细胞后基因的表达情况,并观察转染细胞浸润能力变化。方法 构建了RECK基因的复制缺陷型重组腺病毒载体adRECK ,以adRECK转染大肠癌癌细胞株后,用RT PCR法检测RECK基因在大肠癌中的表达。并用Boyden小室测试转染细胞的侵袭性。结果 RECK基因在转染细胞中有效的表达。被转染细胞浸润能力明显下降。结论 重组腺病毒介导RECK基因能够在大肠癌细胞中有效的表达,转染病毒的大肠癌浸润能力明显下降。
杨德君 +4 more
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重组pDC316-MCMV／hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】克隆人的钠／碘同向转运体（hNIS）基因可编码序列，并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应（RT-PCR）从毒性弥漫性甲状腺肿（又称Graves病）病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因，并克隆到T载体，测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上，获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV／hNIS。采用脂质体转染的方法，把pDC316-MCMV／hNIS重组质粒（实验组）或pDC316空质粒（对照组）分别导人到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、
周泉波 +5 more
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重组腺病毒载体Ad-LMP-1的构建及其转染 MSC后成骨活性
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2010 【目的】 快速构建大鼠LIM矿化蛋白-1基因重组腺病毒载体,转染MSC,探讨LMP-1基因对MSC成骨分化和成骨活性的影响65377; 【方法】 从大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-165377;转化TOP10细菌后,挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1 ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2019 目的构建携带人肝癌细胞CDK2基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体;方法设计能表达CDK2特异性的小干扰RNA(siRNA),构建pAKD-shRNA-CDK2重组质粒,采用磷酸钙共转染法将重组质粒pAKD-shRNACDK2、包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共转染AAV-293细胞,采用定量PCR方法对病毒进行滴度测定;结果三质粒共转染AAV-293细胞48h后,荧光显微镜下检测到GFP绿色荧光,表明共转染成功,测定病毒平均滴度为3.56×1012v.g/ml ...
于水澜, 姜颖, 于英君, 宋高臣
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抑制miRNA-291b-3p表达对H9C2细胞胰岛素信号通路活性的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2016 目的本文探讨抑制miRNA-291b-3p表达在大鼠心肌细胞胰岛素抵抗中的作用,并分析其可能的作用机制。方法 1构建miR-291b-3p mimics和inhibitor腺病毒载体,感染H9C2细胞48h,分析miR-291b-3p水平、AKT/GSK信号通路活性和糖原水平的变化。2TNF-α刺激心肌细胞24h后,再用miR-291b-3p inhibitor腺病毒载体感染H9C2细胞24h,检测AKT/GSK信号通路活性和细胞糖原水平,验证TNF-α通过影响miR-291b ...
李雪杰 +6 more
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以人甲胎蛋白启动子控制表达HIV-1vpr基因的重组腺病毒诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡作用的研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2006 目的研究人甲胎蛋白（AFP）启动子控制表达HIV-1 vpr基因的重组腺病毒对AFP（+）肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡的作用,评估以该策略利用vpr进行肿瘤特异性基因治疗的可行性。方法将以AFP启动子控制HIV-1vpr表达的重组腺病毒rvAdAFP-vpr和空白载体rvAd-null分别感染AFP（+）的肝癌细胞BEL-7402和AFP（-）的肝癌细胞SMMC-7721,利用流式细胞仪检测Vpr的特异性表达和细胞周期分布,用细胞荧光染色和线粒体膜电位检测等方法观察细胞凋亡。结果与对照病毒rvAd ...
魏强 +5 more
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两种不同AFP启动子控制下表达HIV vpr基因的重组非复制型腺病毒获得及鉴定
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 构建及包装由全长 5 1kbAFP启动子和低氧反应元件 （HRE）与 0 3kbAFP启动子两者组合的杂合0 3kbAFP启动子控制下表达HIVvpr基因的两种重组非复制型腺病毒。方法 采用细菌内同源重组腺病毒载体制备方法和PacI酶切、PCR、SouthernBlot鉴定方法。结果 构建及包装出由这两种AFP启动子控制下表达HIVvpr基因的重组非复制型腺病毒 ,经PacI酶切、PCR和SouthernBlot基因整合分析证明构建成功。结论 我们成功构建了的全长5 ...
魏强 +4 more
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