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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的制备YWHAZ重组腺病毒及逆转录病毒,在293T细胞中验证基因表达情况。方法将YWHAZ基因分别克隆至腺病毒穿梭质粒pacAd5CMV-IRES-GFP及逆转录病毒质粒pLXSN-IRES-GFP,并用酶切鉴定、PCR及测序验证后分别转染至HEK 293T及Ampho293细胞,构建重组腺病毒及逆转录病毒。重组病毒分别感染293T细胞,观察荧光验证病毒侵染效果,RT-PCR检测YWHAZ基因表达情况。结果 PCR、酶切鉴定及测序分析,重组腺病毒及逆转录病毒构建正确 ...
王雅雯, 于宏, 王世宝, 黄映辉
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2001 【目的】构建反义c-myb 重组逆转录病毒载体并建立其包装细胞株。【方法】采用RT-PCR 方法, 获取目的基因, 通过TA 克隆方法克隆入pUC19, 再反向亚克隆入逆转录病毒载体pDOR 中。采用DOTAP 法将重组逆转录病毒载体转入包 装细胞, 以NIH3T3 细胞为靶细胞测定产病毒滴度。【结果】序列测定结果与GenBank 中序列一致。c-myb 基因片段已定向 克隆入pDOR。细胞转染表明, 已形成稳定的包装细胞株PA317/ pDOR-my b, 产病毒滴度达5.2 ×104 ～ 9 ...
马会慧 +5 more
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pSiRNA-Shh逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞作用的离体实验研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的建立逆转录病毒介导的人Shh基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用。方法将人Shh基因RNA干扰双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer 5.1-H1 Retro中,构建成携带人Shh基因RNA干扰逆转录病毒载体pSiRNA-Shh,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染恶性脑胶质瘤细胞株U251和CHG-5细胞,用WST-8、RT-PCR和Western Blotting分别检测对转染细胞活性、人Shh mRNA和蛋白表达的影响。结果重组pSiRNA ...
尹昌林 +5 more
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霍乱弧菌新发菌株中
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2022 目的探索霍乱弧菌新发菌株H1的六型分泌系统（T6SS）存在的转录调控机制。方法本研究以转录组测序为基础，分析H1株分别由于vipA敲除（H1ΔvipA），vipB敲除（H1ΔvipB）和clpV敲除（H1ΔclpV）时T6SS基因簇的转录水平，并对其差异基因进行了基因本体论（GO）富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集。结果发现H1ΔvipA有22个差异基因（FDR<0.01，|log2FC|≥1），其中有18个属于T6SS基因簇；并且除vipA外，其转录水平均呈上升趋势 ...
吴文轩, 郭扬, 张幸鼎, 赵文婧
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野生动物学报, 2022 为了解林麝(Moschus berezovskii)脂肪酸合酶(Fatty acid synthase,FASN)基因mRNA序列信息及解析麝香的生物机制,通过转录组测序、Trinity拼接、反转录PCR扩增和Singer测序获取林麝FASN基因mRNA序列,并对FASN蛋白序列进化树构建、二级结构、三级结构、互作蛋白、磷酸化分析及miRNAs结合预测,筛选与麝鼠(Ondatra zibethicus)FASN相同且与牛(Bos taurus)、山羊(Capra hircus)和绵羊(Ovis ...
谌颖莲 竭 航 赵贵军 封孝兰 张承露 吴佳勇 曾德军
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野生动物学报, 2018 旨在研究不同生长时期东北梅花鹿茸生长中心软骨组织基因表达变化,为鹿茸快速生长机制研究提供理论依据。采用Illumina测序技术和生物信息学方法对快速生长期和骨化期鹿茸生长中心软骨组织进行转录组测序、组装、比对和差异基因表达分析。从快速生长期和骨化期鹿茸软骨组织中分别获得4.47和4.45 Gb的测序数据,测序质量值Q20值分别为98.44和98.05。通过Trinity软件组装,分别获得39377和37331条组装序列,平均长度分别为1138和1143 nt ...
刘美欣 赵 雨 张 梅 刘宇昕 胡耀中 幺宝金
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野生动物学报, 2018 随着近年来高通量测序技术的发展,其在生物学研究领域的应用也越来越广泛,并逐渐成为生物学研究的重要方法和工具。基于高通量测序的 RNA-seq技术为揭示野生动物转录组信息提供了更为准确、便捷的方法。本文论述了RNA-seq技术的发展历史和技术特点,并结合野生动物转录组研究中所面临的问题探讨了RNA-seq技术的具体应用和发展方向,以期为野生动物的研究提供方法指导。
肖 慧 吴 尽 赵敏蝶 丁 新 刘学东
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban目的应用纳米孔长读长测序技术，深入分析正常肝实质细胞和肝癌细胞在低氧环境下的特异性转录组变化，以期阐明肿瘤细胞在低氧条件下生存与转移的内在机制，从而为肿瘤的精准靶向治疗开辟新的视角与策略。方法实验选取正常肝实质细胞系THLE-3与肝癌细胞系Hep3B作为研究对象，分别置于常氧与低氧条件下培养48 h后，提取其总RNA。随后，采用纳米孔测序技术，对这两种细胞系在不同氧浓度下的转录组进行高通量、高精度的测序分析。结果本研究成功构建了基于纳米孔三代测序技术的低氧转录本数据集，展现了前所未有的测序精度。通过GO（
高力, 沈晟齐, 高平
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四川大学学报. 自然科学版, 2013 茎瘤芥是十字花科芸薹属植物的变种.本研究在前期的转录组测序和数字基因表达谱(DGE)测序的基础上进一步对榨菜的根组织进行了测序和分析.通过高通量RNA-Seq测序我们获得了高质量的数字基因表达谱数据超过一千万条,其中有约71%能比对到参考基因序列上.我们将根组织的数字基因表达谱数据与榨菜瘤茎膨大过程中的3个时期的数字基因表达谱数据进行了比较,获得了共有的(3组差异表达基因的交集)差异表达基因共3594个,对这些差异表达基因的表达趋势可以分为8个簇.同时对这些差异基因进行代谢途径的功能注释 ...
孙全 +5 more
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Zhejiang Daxue xuebao. Lixue ban, 2012 根据GeneBank中人乙醇脱氢酶ADH1B2基因序列设计引物，以人肝脏总RNA为模板，反转录获得人乙醇脱氢酶基因.将克隆基因与表达载体pPICZB连接，测序正确的pPICZB-ADH1B2电转化毕赤酵母GS115；重组毕赤酵母工程菌经0.5%(v/v)甲醇诱导72 h后目的蛋白以可溶形式表达，经DEAE-Sepharose FF纯化后蛋白酶活性可达8 000 U • mg-1.同时构建重组质粒pCDNA3.1-ADH1B2转染HepG2人肝癌细胞，发现细胞内ROS/GSH水平降低，Akt磷酸化水平降低，
TANGTian-tian(汤甜甜) +4 more
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