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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】构建携 HBx 基因的逆转录病毒载体, 为研究 HBx 基因与肝癌生物学行为间的关系提供基础。【方法】采 用 PCR 技术从 HBV 全基因组中扩增 HBx 基因; 将 HBx 基因亚克隆至质粒 pLNSX, 构建质粒 pLNSHBx,磷酸钙-DNA 共沉淀 法将重组体导入包装细胞系 PA317, 检测培养上清病毒滴度。【结果】应用 PCR 技术成功地从 HBV 基因组中克隆出全长 HBx 基因, 并经序列分析证实; 建立了产病毒细胞株 PA317/HBx,检测其培养上清病毒滴度为 8.
闵 军, 刘彦文, 陈积圣
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[Application Progress of Dual RNA Sequencing in Microbial Research]. [PDF]
Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban, 2022 Xu MM, Sun YT, Chen H, Yang DQ.
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pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王海东 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建人PTEN基因的真核表达载体并在COS-7细胞中高效表达。方法从人喉粘膜组织中分离总RNA,经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到PTEN全基因。克隆入PTEM-T easy载体上,经过PCR、酶切鉴定为阳性的克隆,进行测序分析。然后将所获得的基因定向克隆入PCI-neo载体中构建表达载体。并将其转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果反转录PCR扩增后的产物,在约1.4 kb处可以看见特异性条带,序列分析表明与GenBank中的PTEN基因序列相同。PCI-PTEN真核载体转染COS ...
陈鸥 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue目的 探究临床子宫内膜异位症组及正常的子宫内膜组两者之间的差异性基因，寻找子宫内膜异位症诊断的新型标志物。方法 收集临床卵巢型子宫内膜异位症患者的囊肿组织8例及正常对照的子宫内膜6例行转录组测序，通过差异基因火山图、KEGG信号通路、GO富集分析，寻找差异基因及差异通路。选取测序有差异性的MAPK通路蛋白通过免疫组化验证及PCR验证。结果 转录组测序结果提示子宫内膜异位症组相较于正常组MAPK信号通路蛋白在子宫内膜异位症组，免疫组化及PCR结果显示MAPK6、MAPK10、MAPKBP1 ...
汤中云, 刘金, 孔丽丽
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野生动物学报, 2011 基于核糖体DNA第一与第二转录间隔序列以及5.8S序列,以分离自广州动物园大熊猫体内的蛔虫为研究对象,用保守引物NC5和NC2对核糖体DNA（rDNA）的内转录间隔区ITS-1,ITS-2及5.8S序列进行PCR扩增,扩增后的片段纯化后克隆至pGEM-Teasy载体,重组质粒通过菌液PCR鉴定后,对阳性菌落进行序列测定及分析,鉴定大熊猫蛔虫的种类。结果显示,目的片段总长为910 bp,2个不同样品之间的ITS及5.8S序列没有差异,与GenBankTM中的拜林蛔线虫（Baylisascaris ...
陈绚姣, 唐志玲, 陈武, 金超宇
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野生动物学报, 2020 传统动物转录组的研究主要是在器官或者组织水平上进行转录组测序，忽略了单个细胞在遗传方面的特殊性。scRNA-seq能够在单个细胞水平上揭示细胞内整体水平的基因表达状态和基因结构信息，帮助理解其基因型和表型之间的相互关系。本文主要就scRNA-seq技术的发展历史、在生物学研究中的作用、技术方法特点综述了现阶段在动物研究中的具体应用领域及具体案例，分析了其将来在动物及野生动物研究中更广泛应用前景，以期为动物的研究，特别是野生动物的研究提供方法指导。
赵敏蝶 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的重组表达人核包膜蛋白自身抗原gp210融合蛋白,以用于原发性胆汁性肝硬化（PBC）的临床诊断和病情监测。方法针对基因库中人gp210的cDNA序列设计引物,从正常人的淋巴细胞中提取RNA,通过反转录PCR方法扩增得到相应的基因片段,经测定序列验证后插入表达载体PET28a（+）,构建重组表达载体PET28a（+）-gp210,转化大肠杆菌BL21（DE3）后诱导表达蛋白质,并经SDS-PAGE、Western-blot鉴定重组表达的gp210融合蛋白,进一步经Ni2+亲合层析柱纯化 ...
周晔 +6 more
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MAPK信号通路蛋白在子宫内膜异位症诊治中的作用价值 附视频
Zhongguo shiyan zhenduanxue目的 探究临床子宫内膜异位症组及正常的子宫内膜组两者之间的差异性基因，寻找子宫内膜异位症诊断的新型标志物。方法 收集临床卵巢型子宫内膜异位症患者的囊肿组织8例及正常对照的子宫内膜6例行转录组测序，通过差异基因火山图、KEGG信号通路、GO富集分析，寻找差异基因及差异通路。选取测序有差异性的MAPK通路蛋白通过免疫组化验证及PCR验证。结果 转录组测序结果提示子宫内膜异位症组相较于正常组MAPK信号通路蛋白在子宫内膜异位症组，免疫组化及PCR结果显示MAPK6、MAPK10、MAPKBP1 ...
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[Whole-transcriptome sequencing analysis of placental differential miRNA expression profile in Down syndrome]. [PDF]
Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2022 He J +7 more
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