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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索共刺激分子 B7-1 增强 HBsAg 真核表达载体基因免疫的效果,并用于消除乙肝免疫耐受。【方法】 用高保真 PCR 法扩增目的基因片段 B7-1 及带接头和启动子的 IRES-HBs 基因片段,亚克隆到 pBluescript KS+载体中测序,再 克隆到逆转录病毒载体 PLXSN 中。【结果】所扩增的目的基因片段经测序证实, 未发现序列有改变。先将 B7-1 通过 EcoR Ⅰ 、Xho Ⅰ插入 plxsn 中,构建成 plxsn-B7-1, 再用 Xho Ⅰ 、 BamHⅠ将 ...
周 智 +4 more
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四川大学学报. 自然科学版, 2007 以等质量比的不同发育阶段的麻疯树(Jatropha curcasL.)胚乳为材料构建麻疯树胚乳cDNA文库.初级文库滴度为1.5×106Pfu/mL,重组率为99.7%,插入片段大小为0.4～4 kb,平均约1 kb.全长基因的比例达到20%.推测的蛋白质序列种类主要包括贮存蛋白相关、转录表达调控相关、脂肪酸合成相关及信号传导相关等同源基因序列.编码功能基因的类型与分布情况同Joseph A White等构建的蓖麻胚乳cDNA文库基本一致,个别类型如贮存蛋白合成相关基因的比例相比较低 ...
王治涛 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2001 【目的】构建人Ⅰ 型基质金属蛋白酶基因(MMP1)真核表达重组质粒, 并进行序列分析。【方法】用逆转录聚 合酶链反应扩增人Ⅰ 型基质金属胶原酶cDNA, 获得目的基因片段(1 407 bp)连接至pcDNA3 载体, 并转化大肠杆菌DH5α, 筛 选阳性克隆并鉴定, 并对片断全长进行DNA 序列测定。【结果】所克隆人Ⅰ 型基质金属胶原酶cDNA, 含全长MMP1 编码区, 与GeneBank 公布序列比较, 仅1 318 位的胞苷酸C 突变为腺苷酸A。并成功构建了含有MMP1 ...
彭 慧, 汪 谦, 黄洁夫
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2022 ml或5 g,HRV定性检测采用酶联免疫吸附(ELISA)法,试剂为世界卫生组织(WHO)提供;G型、P型分型采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),引物序列及试验方法均由国家疾病预防控制中心(CDC)提供;HuCV、EAdV和HAstV用RT-PCR、PCR方法检测病毒核酸,引物序列及试验方法亦由国家CDC提供。1.3统计分析应用Excel2020统计软件进行数据整理及分析,计数资料用占比或率表示;应用SPSS 25.0进行卡方检验 ...
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建核转录因子κB抑制蛋白激酶（inhibitor of kappa B kinase,IKK）β真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从人正常肝细胞L02中提取RNA,并利用IKKβ特异性引物通过RT-PCR方法扩增了IKKβcD-NA,并克隆入pcDNA3载体中,构建重组载体pcDNA3-IKKβ。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测IKKβ的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示 ...
张冬梅 +6 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2004 目的 构建人VEGF16 5腺病毒表达载体 ,探讨应用血管内皮生长因子 （VEGF）基因治疗脑梗死的可行性。方法 采用分子克隆技术 ,以质粒hVEGF16 5·SR为模板 ,扩增hVEGF16 5成熟cDNA。经穿梭质粒PShuttle克隆到腺病毒质粒上 ,构成Adeno VEGF16 5腺病毒重组质粒 ,经酶切及测序鉴定正确后 ,包装成为重组Adeno VEGF16 5腺病毒 ,并进行电镜观察及滴度测定。用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达。结果 ...
张海鸥, 吴军, 林凯华, 易黎
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[Functional characteristics of YAP-positive hepatocytes expression in an early stage of NASH with transcriptome sequence analysis]. [PDF]
Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi, 2022 Zeng WL, Liang JE, Liu YX, Wang Y.
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四川大学学报. 自然科学版, 2014 通过RT-PCR技术从甘薯的总RNA中克隆得到了全长的己糖激酶基因,测序结果表明HXK(hexokinase)基因编码区长1491bp,编码496个氨基酸,其翻译的蛋白质分子量为53.4kD,其氨基酸序列与其它已知高等植物HXK基因具有很高的同源性.构建了原核表达载体pET-HXK,经IPTG诱导后可表达获得相对分子量约为71kD的外源融合蛋白,与预测结果一致.并对HXK基因在不同组织中的转录水平进行了数字表达谱和荧光定量分析.
雍彬 +4 more
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四川大学学报. 自然科学版, 2015 本研究以猪作为研究模型,对GHR基因启动子区开展了克隆、转录因子结合位点分析和启动子活性鉴定.结果表明:家猪GHR基因或由两个启动子(GHR-P1和GHR-P2)控制.GHR-P1的部分核苷酸序列与牛、羊对应核苷酸序列具有较高的同源性,但功能分析显示其启动子活性较低.针对GHR-P2的实验结果表明其具有典型的GHR组成型启动子特征,荧光素酶报告实验表明其具有启动子活性,因此我们推测本次克隆获得的GHR-P2是猪GHR的组成型启动子.
徐敏 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2010 【目的】 探讨鼻咽癌细胞中启动EB病毒核抗原1(EBNA1蛋白)表达的EB病毒Q启动子(Qp)的变异特征,比较有第62 225位点(g→a)和第62 422位点(g→c)两个点突变的Qp与原型Qp(B95.8型)的功能学差异及其生物学意义65377;【方法】 采用PCR的方法扩增29例鼻咽癌组织石蜡标本和14例健康成人外周血标本(总共43例)中的Qp序列,PCR产物测序后分析其突变情况,统计学分析Qp中的点突变与鼻咽癌的相关性65377;把突变型和原型Qp分别克隆到荧光素酶报告基因载体上,检测相对光强度(
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