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SARA低表达对Activin A/Smads环路活性的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2019 目的探讨下调Smad锚捉蛋白(SARA)表达对Activin A/Smads环路活性的影响。方法利用RNA干扰技术,设计靶向大鼠SARA基因的短发卡RNA(shRNA),瞬时转染激活素A(ActA)高表达的大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞。转染48h后倒置荧光显微镜观察转染效率,实时定量PCR、Western blot检测SARA基因的表达情况。对阳性转染组及阴性转染组细胞换液3h后,Western blot检测Smad3总蛋白及磷酸化蛋白的表达。结果靶向SARA基因的SARA-shRNA及对照NC ...
石晓花 +8 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 使用多聚阳离子脂质体载体( lipofectAMINE)在体外建立转γ -干扰素( IFN-γ )基因的大鼠肝细胞模型。方 法: 利用 lipofectAMINE 在体外将 IFN-γ基因转染大鼠肝细胞。分别以 RT-PCR 和 ELISA 方法检测所转IFN-γ基因在大鼠肝细胞 的转录和表达情况。结果: 以 lipofectAMINE 为载体的 IFN-γ基因转染大鼠肝细胞后, 可被有效的转录并产生具有生物活性的 IFN-γ。结论: IFN-γ基因可被成功转染入大鼠肝细胞并可有效表达 ...
王 坤 郭 英 闵 军 陈积圣
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抵抗素基因转染HepG2细胞对转录因子Sp1和PPARγ mRNA表达的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的观察抵抗素基因转染HepG2细胞对转录因子Sp1（Transcription Sp1,）和过氧化物酶体增殖体激活受体（Peroxisome Proliferator-Activated Receptorγ,PPARγ）mRNA表达的影响。方法把pc DNA3.1抵抗素基因真核表达载体转染入HepG2肝细胞,用RT-PCR方法进行Sp1和PPARγ)mRNA表达的检测。结果抵抗素基因转染HepG2细胞后,Sp1的表达明显增强,P0.05。结论抵抗素基因转染HepG2细胞后,可明显增强Sp1的表达 ...
金正贤, 赵虹, 杜珍武, 张桂珍
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】构建携带加强型黄色荧光素蛋白(EYFP)和人类血管内皮生长因子(VEGF)的双基因真核表达载体 pIRES-EYFP/ VEGF121 , 用EYFP 作标记基因, 研究外源性VEGF121 基因在大鼠原代培养肝细胞转染表达, 为实时监测 VEGF121基因修饰肝细胞移植后状态提供基础。【方法】将pcDNA3VEGF121中VEGF121定向克隆到pIRES-EYFP , 构建重组质 粒pIRES-EYFP/ VEGF121 , 经酶切、PCR 扩增和部分DNA 序列分析证实后 ...
王金林 +3 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】探讨高效阳离子脂质体介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的方法。【方法】用新型阳离子脂质 体DOSPER 包裹携带lac Z 报告基因的质粒pCAGGS-lacZ 按3 种方法转染小鼠脾细胞, ①常规方法直接转染;②脾细胞经刀 豆球蛋白A(Con A)活化后再按常规方法转染;③用黏附辅助脂质体法(adhesion-assisted lipofection , AAL)转染脾细胞。转染 效率用X-gal 染色法测定。【结果】上述3 ...
何承伟
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的通过观察转染生肌调节因子（myoblast determination,MyoD）基因和连接蛋白43（Connexin）基因的大鼠真皮成纤维细胞（dermal fibroblast,DFs）生物学功能的变化,探讨Myo和Cx43基因转染DFs细胞的意义。方法采用Gateway技术,构建真核质粒表达载体,利用慢病毒（LV）表达系统,将大鼠MyoDcDNA和Cx43 cDNA转入大鼠成纤维细胞中,经Blasticidin筛选培养,通过RT-PCR,Western ...
张旭敏 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建针对细胞内氯通道4（CLIC4）的短链干涉RNA（siRNA）及其表达载体,转染细胞后观察其对CLIC4基因的干涉作用。方法设计CLIC4靶向的发夹状siRNA,据此设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接到pSilencer3.1-H1载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体转染法转染大鼠神经胶质瘤细胞C6,通过RT-PCR检测CLIC4基因表达水平的变化。结果酶切鉴定与DNA测序分析证明CLIC4基因的siRNA载体构建正确,RT-PCR结果表明CLIC4基因的表达水平明显降低 ...
袁兆新 +8 more
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野生动物学报, 2015 根据Gen Bank中发表的犬瘟热病毒(CDV)的基因组序列设计了H和F基因的2对引物,通过RT-PCR扩增出从发病小熊猫分离的CDV的H和F基因,并将其克隆入到18T-simple载体上进行测序。使用Kpn I和Xho I限制性内切酶对重组载体进行双酶切并将目的基因克隆到pcDNA 3.1表达载体上,构建完成后转染293T细胞,转染48 h后,再利用RT-PCR和Western-blot检测目的基因的转录和目的蛋白的表达。结果表明,表达载体经转染后,在293T细胞中,目的基因均能得到转录而且正确表达 ...
张晓明 陈 武 彭仕明
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2008 【目的】将G250抗原cDNA片段转染入sp2/0细胞中并获得稳定表达,为G250基因疫苗研究提供实验工具。【方法】用脂质体转染法将鉴定好的重组质粒转染入sp2/0细胞中,经G418筛选得到稳定表达,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、间接免疫荧光、Western blot检测G250基因在sp2/0细胞中的表达。【结果】转染2周后,筛选出阳性sp2/0细胞克隆,通过RT-PCR证实有G250mRNA转录,间接免疫荧光可以见到阳性细胞,Western blot证实有G250抗原表达。【结论 ...
张亚东 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2004 【目的】 用流式细胞仪(FCM)快速检测外源性血管内皮生长因子基因(VEGF基因)在大鼠原代培养肝细胞转染表达,根据结果优化其转染表达条件?【方法】 以加强型黄色荧光素蛋白(EYFP)为标记,用FCM快速检测重组质粒pIRES-EYFP/VEGF121在大鼠原代培养肝细胞中转染表达,根据结果优化pIRES-EYFP/VEGF121转染表达条件?【结果】 pIRES-EYFP/VEGF121得以成功构建,并转染大鼠原代培养肝细胞;优化的转染表达条件:在细胞数密度0.1×106/mL,质粒孵育时间30 ...
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