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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2018 目的构建含EGFP标签的人β-神经生长因子（hβ-NGF）的真核表达载体,观察和分析其在HEK293细胞中的定位,为后续基因转移实验奠定基础。方法PCR扩增hβ-NGF基因编码框,连接到pEGFP-N1载体,将HEK293细胞分为对照组（不转染）、空载组（转染pEGFP-N1质粒）和实验组（转染pEGFP-N1-hβ-NGF质粒）,后两组采用脂质体法转染,24h后荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达及细胞定位,通过蛋白序列数据库和生物信息学软件进一步分析亚细胞定位。结果经双酶切和测序鉴定,pEGFP-N1 ...
杨智 +5 more
doaj
Study on the Changes and Functions of Prohibitin During the Apoptosis of the Human Osteosarcoma MG-63 Cells [PDF]
, 2013 本论文以姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡，运用亚细胞蛋白质组学技术对MG-63细胞凋亡前后核基质蛋白的组成变化进行系统分析，发现细胞凋亡过程中的特异核基质蛋白Prohibitin表达下调。生物信息学初步分析显示差异表达蛋白参与了细胞死亡和存活以及细胞周期等调控过程，涉及G2/M期DNA损伤检验点调控、Myc介导的细胞凋亡等信号通路，而Prohibitin是其中的关键调控蛋白。在此基础上，对Prohibitin在MG-63细胞诱导凋亡前后的表达和定位变化，及其与相关癌基因 ...
路锟
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建趋化因子受体4（CXCR4）的特异RNA干扰载体。方法在GenBank数据库查询CXCR4基因的登陆号为NM-003467。使用Invitrogen公司的在线设计软件Invitrogen′s RNAi Designer,设计miR RNAi,选择713这个位点设计成相应的Oligo DNA,退火DNA oligos生成双链oligos,应用T4DNA连接酶连接双链oligos与表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR。酶切鉴定和测序鉴定 ...
王海涛, 金宏林, 王莹, 金春顺
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HepG2细胞中与戊型肝炎病毒衣壳蛋白相互作用蛋白的初步研究 [PDF]
, 2006 利用重组戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白片段p239(368~606 aa)形成的类病毒颗粒作为亲和层析诱饵蛋白,HepG2为细胞模型,筛选与p239类病毒颗粒特异性相互作用蛋白。经过二维电泳分离,MALDI-TOF-MS分析鉴定得到GRP78/Bip,HSP90,alpha-tubulin及P43四个与p239有相互作用的候选蛋白。GRP78/Bip为热休克蛋白家族成员,体外免疫共沉淀实验结果证实,其与p239有特异性的结合。此研究结果为深入研究HEV的感染过程如吸附、入胞 ...
何水珍 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建含基因NLRC3的重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3。方法利用基因重组技术将NLRC3基因插入到真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA中,经酶切,PCR,测序及Western确定重组体质粒构建成功并转染。结果重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3构建成功。并将重组体转染至hUMSC细胞中并进行单克隆筛选扩增。结论重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3构建成功,并成功转染到hUMSC中,为下一步研究NLRC3的转染研究奠定基础。
宛莹, 张世冬, 梁爽, 聂德志
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, 2006 【目的】构建小鼠端粒酶蛋白亚单位（mouse telomerase reverse transcriptase，mTERT）基因重组腺病毒载体，为下一步研究其体外表达和动物实验研究提供基础。【方法】从肝癌细胞中提取总RNA。采用RT-PER技术扩增mTERT的基因编码区序列，将序列定向克隆至真核表达载体pAC，将此表达质粒与腺病毒重组质粒pJM17共同转染293细胞，经同源重组产生重组腺病毒载体Ad-mTERT，纯化后的重组腺病毒载体Ad-mTERT在293细胞大量扩增并通过氯化铯密度梯度离心法纯化 ...
冯炼强 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术探索HIWI基因的作用的研究做准备。方法根据HIWI mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入pGenesil-2载体,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体中,经测序证明与设计相同。结论成功构靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究HIWI基因在干细胞和肿瘤细胞中的作用机制及后续的体内外RNAi实验研究奠定了基础。
陈岐辉 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索共刺激分子 B7-1 增强 HBsAg 真核表达载体基因免疫的效果,并用于消除乙肝免疫耐受。【方法】 用高保真 PCR 法扩增目的基因片段 B7-1 及带接头和启动子的 IRES-HBs 基因片段,亚克隆到 pBluescript KS+载体中测序,再 克隆到逆转录病毒载体 PLXSN 中。【结果】所扩增的目的基因片段经测序证实, 未发现序列有改变。先将 B7-1 通过 EcoR Ⅰ 、Xho Ⅰ插入 plxsn 中,构建成 plxsn-B7-1, 再用 Xho Ⅰ 、 BamHⅠ将 ...
周 智 +4 more
doaj
Studies on the Pathogenic Bacterium and the DNA vaccine of Ulcer Disease in cage-cultured Epinephelus awoara [PDF]
, 2005 弧菌病是海水鱼类养殖业中造成经济损失最严重的细菌性疾病，本论文致力于养殖石斑鱼弧菌病病原菌及DNA免疫防治的研究，主要结果如下：1、调查研究了2002年夏季厦门同安湾网箱养殖石斑鱼大面积暴发的溃疡病，对细菌病原进行分离纯化，编号为TS-628，回归感染证实这株菌是引发同安湾网箱养殖石斑鱼溃疡病的病原菌。采用生化鉴定的方法对病原菌进行初步鉴定，同时采用PCR技术获得病原菌16SrRNA基因一段长1121bp的序列，该序列登录基因库（序列号为AY747308 ...
覃映雪
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建调控人核心蛋白聚糖基因特异性在肺癌细胞A549内表达的基因表达载体,为进一步应用该基因进行肺癌靶向治疗的研究奠定实验基础。方法应用PCR技术从人外周血基因组中扩增肺癌细胞特异性表达的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子,利用基因重组技术将该启动子插入真核细胞表达载体pcDNA3.1（+）,替换该载体的CMV启动子与增强子序列,从而构建成由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因的启动子启动基因表达的基因表达载体。将人核心蛋白聚糖基因通过基因重组技术插入到上述载体人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子的下游 ...
吕俊锋 +3 more
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