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hCAP-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的研究人源阳离子抗菌肽（hCAP）-18/LL-37全长肽真核表达产物对树突状细胞分化成熟的影响。方法将已构建的hCAP-18/LL-37全长肽真核表达载体pcDNA4/Myc-His-hCAP-18转染Hela细胞株,在转染后48 h收获培养上清;人外周血单个核细胞分离,体外定向诱导分化成树突状细胞（DC）;将转染后收获的培养上清与体外培养的DC共同孵育,48 h收获DC,经流式细胞仪检测DC表面分子CD83、CD86、CD40及HLA-DR的表达。结果FCM结果显示:pcDNA4/Myc-His ...
袁红艳, 许娜, 王凤丽, 常雅萍
doaj
, 2009 本发明涉及一种外切菊粉酶的真核表达方法。其主要步骤是：首先将马克斯克鲁维酵母的外切菊粉酶的核苷酸序列(如SEQ ID No：1所示)通过限制性内切酶位点与毕赤酵母表达质粒pPICZαA连接获得重组表达载体，然后将重组表达载体导入毕赤巴斯德酵母宿主菌X-33或SMD1168中经诱导发酵表达目的蛋白(马克斯克鲁维酵母外切菊粉酶)。本发明为开发具有工业应用价值的外切菊粉酶奠定了基础 ...
赵宗保, 张素芳, 杨 帆
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, 2004 根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(Helicoverpaarmigerasinglenucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)fp25k基因的序列,设计引物,引入适当的酶切位点,利用PCR扩增出基因片段。将该基因片段克隆至原核表达载体pProEXHTb,经IPTG诱导,在大肠杆菌DH5α中获得了高效表达,表达产物的大小为32kDa。纯化蛋白产物免疫家兔制备抗血清。该抗血清可与原核表达的GST ...
吴东,邓菲,胡志红,袁丽,孙修炼
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的研制高效表达型T载体用于基因的表达及蛋白功能分析。方法限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体pcDNA3,回收线性化质粒片段与三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（dTTP）70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化。将增强绿色荧光蛋白基因（EGFP）和中国旱獭α干扰素基因（cwIFNA5）分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭α干扰素的生物学活性。结果成功构建了表达型T载体 ...
卢银平, 祝建芳, 刘朝, 董继华
doaj
, 2018 2A肽(P2A)介导的多基因表达载体具有高裂解活性且上、下游基因等摩尔表达等优点,已广泛应用于动物转基因研究.文昌鱼(amphioxus)作为一种新兴的模式动物,尚无应用这种表达载体的报道,为此在pXT7转录系统基础上构建一个P2A介导的多基因表达载体.将体外转录的P2A介导的mRNA注入文昌鱼卵细胞并受精后,经激光共聚焦显微镜和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表明,该mRNA在文昌鱼胚胎中能够高效地翻译和剪切,并且在信号肽的作用下eGFP蛋白定位于细胞核中 ...
李光, 华俊豪, 王义权
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒，探讨抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。【方法】用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织扩增抵抗素基因cDNA，A／T克隆于pGEM-T载体，再亚克隆于pcDNA3．1（＋）和pcDNA3．1（-）真核表达载体，构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒pcDNA3．1^（＋）resistin和pcDNA3．1^（-）-resistin^（-）。将pcDNA3．1^（-）resistin^（-
李芳萍 +4 more
doaj
, 2004 新霉素抗性基因(neo)是原核生物和真核生物表达载体的常用抗性选择基因。本研究将neo基因与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体pAJ401重组;构建了以neo基因为报告基因的启动子探针穿梭载体pAJN161;并在neo基因上游插入了多克隆位点;方便克隆外源启动子。此载体的成功构建为同时检测启动子在原核生物和真核生物中的启动功能创造了条件。用pAJN161载体检测从嗜盐古生菌染色体上克隆到的具有大肠杆菌启动子功能的DNA片段;发现RM10和RM14在酿酒酵母中的启动活性远高于酿酒酵母自身的PGK启动子活性 ...
沈韫芬, 黄玉屏, 沈萍, 杨洋
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的在人骨髓间充质干细胞内大量稳定的表达人白血病抑制因子（human Leukemia Inhibitory Factor,hLIF）。方法应用RT-PCR方法从人蜕膜组织中扩增出白血病抑制因子,并将其构建于pcDNA3.1真核表达载体上。利用脂质体进行基因骨髓间充质干细胞的转染。利用G418进行基因的稳定表达筛选。通过RT-PCR和Western blot方法进行基因表达的检测。结果成功扩增出人白血病抑制因子基因,成功构建hLIF-pcDNA3.1真核表达载体。转染LIF-pcDNA3 ...
杨春辉, 杜珍武, 杨光, 尹维田
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, 2006 RNA干扰技术已广泛应用于沉默基因表达的研究.本文分析烟草花叶病毒(TMV)基因序列,选择设计编码小分子发卡结构RNA(hpRNA)的cDNA;并根据农杆菌双元载体质粒p2355多克隆位点区限制性酶切位点,两端分别加入XbaI和BamHI酶切位点;分别合成单链DNA复性后插入到p2355上,经PCR、测序验证,表明已成功构建了具有潜在表达烟草花叶病毒siRNA的植物表达载体 ...
刘华玲, 张义正, 谈心, 马欣荣
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含副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus) Fla I基因真核表达重组质粒的构建 [PDF]
, 2002 用ClaⅠ /EcoRⅠ双酶切带有副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)极鞭毛蛋白FlaI基因的质粒pMD18 FlaI,回收目的基因片段 ,插入到真核细胞表达载体pIRESneo同样经ClaⅠ /EcoRⅠ切开的窗口中 ,成功地将FlaI克隆到pIRESneo中 ,获得有意义的重组质粒pIRESneo FlaI.构建的pIRESneo FlaI真核表达重组质粒 ...
张朝霞 +5 more
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