Results 31 to 40 of about 1,190,306 (139)
, 2003 以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT。将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达,表达量为25％-30％。Western印迹分析证实了重组蛋白在大肠杆菌中表达后可被信号肽酶有效识别,切割后的重组蛋白具有良好的免疫学活性。对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性 ...
杨海杰 +5 more
core
, 2004 【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒 ...
core
, 2005 从籼稻川75A(OryzasativaL.)黄化苗叶片中直接提取基因组总DNA.根据文献报道的水稻花药绒毡层特异启动子Osg6B序列设计引物,采用TouchdownPCR技术获得水稻花药绒毡层特异表达的启动子Tsp1,将该片段克隆在载体pMD18-TVector上转化到大肠杆菌JM109,并酶切和PCR验证.序列分析发现,该片段与Osg6B启动子同源性为96%,且具有真核生物启动子的多种特征序列,表明启动子Tsp1为来源于籼稻川75A中的水稻花药绒毡层特异表达的启动子 ...
陈荣军 +4 more
core
, 2014 目的构建PHD2基因原核表达载体pET43.1b(+)-PHD2,实现Nus-PHD2融合蛋白在大肠埃希菌中的可溶性表达。方法用Sac I酶切pET43.1b(+)制备线性化载体,设计与线性化载体两端具有至少15个同源序列的特异性引物,以真核重组质粒pCMV6-Entry-EGLNl为模板,PCR法扩增PHD2目的基因。采用In-Fusion技术构建原核表达载体pET-43.1b(+)-PHD2,并将其导入大肠埃希菌BL21 (DE3)中诱导表达。用SDS-PAGE和Western ...
许国旺 +4 more
core
鼠白细胞介素-2 受体 α 、β链基因反义 RNA 真核表达质粒的构建 [PDF]
, 2000 【目的】构建鼠 IL-2R α与β 链基因的反义 RNA 真核表达质粒, 为反义 RNA 基因治疗细胞免疫相关疾病作准备。 【方法】用限制性内切酶从克隆载体上切下鼠 IL-2R α与β 链cDNA 及鼠 IL-2启动子, 克隆入真核表达质粒 pcDNA3 的多克隆 位点上,用酶切或 PCR 法鉴定正反连接。【结果】得到 4 个反向连接的重组质粒: pcAnti-mIL-2Rα , pcAnti-mIL-2Rβ ,pcAntim IL-2Rα β 及 pciAnti-mIL-2Rα β 。前三者由CMV ...
何承伟, 马涧泉
core
, 2005 用RACE PCR获得了鳜白介素-1β(IL-1β)的全长cDNA.鳜IL-1β的cDNA全长为1298 nt(核苷酸),其5′非编码区包含UTR 93 nt;3′非编码区包含452 nt;其开放阅读框内包含753 nt,翻译成251个氨基酸.将鳜IL-1β克隆到原核表达载体pET-32a上,在大肠杆菌Rosetta- gami(DE3 ...
王改玲,孙宝剑,王高学,聂品
core
人类Foxm1b基因的原核表达、抗体制备及其对肝癌细胞中Foxm1b蛋白的识别 [PDF]
, 2007 【目的】构建人类Foxm1b基因的原核表达载体，表达并纯化蛋白，制备多克隆抗体，并用此抗体检测肝癌细胞中Foxm1b基因的表达，为进一步研究Foxm1b基因的功能奠定基础。【方法】从GenBank中下载人类Foxm1b基因全长cDNA序列并用Pegene软件分析其可能的抗原表位，设计引物．应用RT—PCR获得含抗原表位的Foxm1b基因片段，重组人原核表达载体pET-28a，在大肠杆菌BL-21（DE31中诱导表达，应用亲和层析法获得纯度较高的原核表达蛋白并免疫大鼠制备多克隆抗体 ...
曾志荣 +4 more
core
激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体的构建及表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建激活素受体相互作用蛋白（activin receptor interacting protein zip,ARIPzip）真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从小鼠成纤维细胞3T3中提取RNA,并利用ARIPzip特异性引物通过RT-PCR方法扩增了ARIPzip cDNA,并克隆入pcDNA-Flag载体中,构建重组载体pcDNA-F-ARIPzip。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测ARIPzip的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功 ...
裴颖 +7 more
doaj
靶向人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶多肽药物表达载体的构建 [PDF]
, 2019 目的构建人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶(IN)表达载体用于双分子荧光互补技术筛选多肽药物。方法PCR扩增HIV-1 IN的全长基因序列,将目的片段插入至pBiFc-VN173载体中,并对重组质粒pBiFc-VN173-IN进行双酶切及测序鉴定。将重组质粒pBiFc-VN173-IN和对照组质粒pBiFc-VN173分别转染HEK293T细胞,采用Western blot法和免疫荧光细胞化学染色法检测IN的表达。结果通过高保真PCR、载体构建和鉴定,成功获得IN表达载体pBiFc-VN173 ...
魏碧娜 +5 more
core +1 more source