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以β-淀粉样蛋白为靶的单价及二价真核表达载体的构建和表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建以β-淀粉样蛋白为靶单价及二价真核表达载体pcDNA3．1-Aβ1-42、pcDNA3．1-AB42x，并在真核细胞中表达目的蛋白。【方法】PCR法扩增编码B一淀粉样蛋白的目的基因，利用基因克隆技术构建单价及二价真核表达载体；应用酶切及测序鉴定真核表达载体构建成功后，用Western blot和细胞免疫组化染色检测其在真核细胞中的表达。【结果】相应的双酶酶切能够获得插入的目的基因片段（分别为137bp和269bp），测序未发现突变；Western blot结果可见两条约为4ku和8ku的条带，
王烈峰 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B（MCSB）中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM ...
卢燕茹, 江振友
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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
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小鼠Neuronatin基因真核表达载体构建及其蛋白产物的检测
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2008 【目的】 构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP*9鄄N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白65377; 【方法】 RT*9鄄PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中的定位,Western blot检测其在真核细胞中的表达65377;【结果】 RT*9鄄PCR法扩增出Nnat基因的两种亚型,相应的双酶切能够获得插入的目的基因片断,测序分析未发现突变 ...
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绿色荧光蛋白基因 gfp 真核表达载体 pcTKGFP 的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 构建携带绿色荧光蛋白基因( gfp)的真核表达载体 pcTKGFP,为利用绿色荧光蛋白标记在实验动物体内进 行自杀性基因治疗的研究和转基因动物打靶载体的构建提供基因材料。方法: 采用 PCR 技术从商品质粒 pEGP -C1 中扩增出 gfp( 799 bp) ,PCR 产物用 XbaⅠ和 BamH Ⅰ双酶切后定向克隆至真核表达载体 pcTK, 重组质粒 pcTKGFP 用限制性内切酶和 DNA 序列分析进行鉴定。结果: 部分 DNA 序列分析证明 PCR 产物为 gfp, 成功筛选到携带 ...
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miR-18a过表达及抑制表达人鼻咽癌细胞株的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2018 【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系，为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中 的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中，DNA 测序鉴定；将构建好的载体转染293T细胞，获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体，感染人鼻咽癌细 胞CNE1和CNE2，嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系，PCR及western blot鉴 定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR ...
常利红 +5 more
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HBsAg及 B7-1 双表达重组逆转录病毒载体的构建 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索共刺激分子 B7-1 增强 HBsAg 真核表达载体基因免疫的效果,并用于消除乙肝免疫耐受。【方法】 用高保真 PCR 法扩增目的基因片段 B7-1 及带接头和启动子的 IRES-HBs 基因片段,亚克隆到 pBluescript KS+载体中测序,再 克隆到逆转录病毒载体 PLXSN 中。【结果】所扩增的目的基因片段经测序证实, 未发现序列有改变。先将 B7-1 通过 EcoR Ⅰ 、Xho Ⅰ插入 plxsn 中,构建成 plxsn-B7-1, 再用 Xho Ⅰ 、 BamHⅠ将 ...
周 智 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 构建携带人神经生长因子( hNGF)基因的真核细胞表达载体, 为应用 NGF 进行老年性痴呆(AD)等疾病基 因治疗打基础。方法: 应用基因重组技术将 hNGF cDNA 克隆到逆转录病毒载体 pLXSN 中 ,用限制性内切酶酶切分析重组质粒 pLNGFSN 中 hNGF 基因的插入方向,用 PCR、斑点杂交和 Southern 杂交对重组质粒 pLNGFSN 作进一步鉴定。结果: hNGF cDNA 已正确地克隆到逆转录病毒载体 pLXSN 中,而构建成重组逆转录病毒载体 pLNGFSN ...
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bcl-2 基因克隆、转染及其在PC12 细胞中的表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】研究bcl-2 基因(bcl-2)在PC12 细胞中的表达。【方法】构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2 , 采用脂质体介 导将重组质粒导入PC12 细胞, Western blo t 和原位免疫组化检测外源基因表达。【结果】本实验成功构建了真核表达载体 pcDNA3-bcl-2, 并用脂质体介导的方法获得了稳定表达bcl-2 的细胞克隆;Western blo t 显示有26 ku 的蛋白质表达, bcl-2 单克 隆抗体免疫组化染色呈阳性反应。【结论】重组质粒pcDNA3-bcl ...
吴永青
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体（pSUPER-SSH1L）。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SSH1L蛋白的表达。结果酶切鉴定、DNA测序以及Western blot检测结果证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向人SSH1L基因表达的siRNA干扰质粒载体pSUPER-SSH1L ...
邢志军, 赵建武, 王岩, 高忠礼
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