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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建HBsAg真核表达载体,转染CHO细胞并检测其表达。方法通过PCR法扩增出乙肝表面抗原的S基因和dhfr基因,分别克隆到T载体上,然后分别将S基因和dhfr基因克隆到pCI载体上,将pCI载体的CMV启动子替换为hEF-1α启动子。对新构建的pEF1-αS-dhfr真核表达载体进行酶切和测序鉴定。用脂质体法转染CHO（dhfr-）细胞,并用ELISA法检测HBsAg表达。结果hEF-1α启动子、S基因和dhfr基因经测序与Genbank报道一致。真核表达载体pEF1-αS ...
张艳, 时成波, 郭丽, 范洪学
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的构建人类GPC3重组真核表达载体。方法以人类肝脏cDNA文库为模板扩增出GPC3基因序列,应用T克隆载体及pcDNA真核表达载体重构,将质粒转化进入HLE人肝癌细胞系,进行荧光免疫方法检测。结果 测序结果序列正确,荧光染色转染质粒的HLE细胞可见细胞浆和细胞膜上有GPC3的表达。结论成功构建真核表达载体pcDNA-GPC3,并在真核细胞中可以表达。
李莉 +4 more
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Construction of eukaryotic vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and expression in C6 cell [PDF]
, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王占祥 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建靶向人SSH1L的siRNA真核表达载体（pSUPER-SSH1L）。方法将设计好的SSH1L的siRNA的寡聚脱氧核苷酸链与真核表达载体pSUPER连接,构建重组pSUPER-SSH1L真核表达载体。对该重组表达载体进行酶切鉴定及DNA测序;通过Western blot检测SSH1L蛋白的表达。结果酶切鉴定、DNA测序以及Western blot检测结果证实表达质粒构建成功,无碱基突变。结论成功构建了靶向人SSH1L基因表达的siRNA干扰质粒载体pSUPER-SSH1L ...
邢志军, 赵建武, 王岩, 高忠礼
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Effect of Beta-arrestin1 and TFF3 on Biological Characteristics of Human Gastric Cancer BGC-823 Cells [PDF]
, 2011 Beta-arrestin包括Beta-arrestin1和Beta-arrestin2两种蛋白，它们在体内广泛表达，可以调节G蛋白耦联受体（Gproteincoupledreceptor，GPCR）的脱敏和内吞，是多种信号通路中的多功能调节因子。TFF3是三叶因子家族（Trefoilfactors-TFFs）成员之一，TFFs是主要由胃肠道黏液细胞分泌的可溶性小分子多肽，它们在慢性炎症、黏膜保护修复、细胞凋亡、组织化生及肿瘤的发生发展等方面具有重要的生物学功能。本实验首次在胃癌细胞BGC ...
王璐
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Effect of Exogenous RGS16 Gene Transfection on Growth of Glioma Cell Line C6 [PDF]
, 2006 背景与目的:有研究表明野生型p53可以诱导RGS16表达,而RGS16可能与胶质瘤的发生有关。本研究旨在探讨RGS16基因转染对大鼠胶质瘤C6细胞生长的影响。方法:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-RGS16,脂质体法转染C6细胞,经G418筛选后荧光显微镜观察细胞中增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorscentprotein,EGFP)的表达,RT-PCR证实RGS16的mRNA表达,免疫细胞化学方法检测细胞中RGS16蛋白表达。最后利用流式细胞仪、生长曲线 ...
张丰(第四军医大学西京医院病理科) +5 more
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人乳头瘤病毒18型E6蛋白真核表达载体的构建及其在子宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建并鉴定p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体,并转染Hela细胞后,检测其在Hela细胞中的表达。方法用RT-PCR法从Hela细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段连接到pMD-18T载体上,通过限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ酶切,T4连接酶连接到含有上述酶切位点的p3×flag-myc-CMV-24真核表达载体上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6转染入Hela细胞48h后 ...
卫莹 +7 more
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Construction of polybutycyanocrylate nanoparticles(PBCA-NPs) loaded P16a gene and expression in Hep-2 cell [PDF]
, 2010 目的制备携带P16A基因的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒并在喉癌细胞中进行表达。方法选用乳化聚合法制备PbCA-nPS,以激光粒度分析仪及透射电子显微镜分析纳米粒的形态和粒径。用阳离子表面活性剂十六烷基三乙基溴化铵(CTAb)对纳米粒进行表面修饰。构建真核表达载体PIrES2-EgfP-P16A经过酶切鉴定及测序后与PbCA-nPS连接,转染喉癌细胞HEP-2,荧光显微镜检测转染效率,蛋白印迹法检验P16A基因的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果所制PbCA-nPS粒径均匀、zETA电位较高,较为理想 ...
周燚, 赵德安, 骆启聪
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建人紧密连接蛋白claudin-6的cDNA真核表达载体。方法应用RT-PCR、T-A克隆、限制性内切酶切及亚克隆等技术将claudin-6基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结果酶切鉴定、PCR扩增以及序列分析表明已经将claudin-6基因全长序列克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结论获得了人claudin-6基因的全长cDNA片段,构建了claudin-6原核克隆载体和真核表达载体。实验中发现,中国人claudin-6基因的461位点碱基为A ...
吴琼 +7 more
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Antimicrobial activities of Scygonadin2 and Sphistin from Scylla paramamosain and the synergistic effects with antibiotics against bacteria [PDF]
, 2015 抗生素（antibiotics）作为最广泛应用的抗细菌药物，目前被广泛应用于水产养殖业中，但超量、滥用抗生素造成了水产品药物残留超标等一系列问题，如何控制抗生素的过量应用是亟待解决的重要科学与生产问题，因此寻找抗生素的有效替代品是目前国内外本领域的研究热点之一。抗菌肽（antimicrobialpeptide）是先天性免疫中的重要免疫活性因子，具有广谱的抗菌性，且不会产生耐药性，在所有替代抗生素的选择中，抗菌肽被认为是普遍存在于各种生物中由基因编码的“天然抗生素”，是抗生素的最佳替代品之一 ...
刘杰
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