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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建HBsAg真核表达载体,转染CHO细胞并检测其表达。方法通过PCR法扩增出乙肝表面抗原的S基因和dhfr基因,分别克隆到T载体上,然后分别将S基因和dhfr基因克隆到pCI载体上,将pCI载体的CMV启动子替换为hEF-1α启动子。对新构建的pEF1-αS-dhfr真核表达载体进行酶切和测序鉴定。用脂质体法转染CHO（dhfr-）细胞,并用ELISA法检测HBsAg表达。结果hEF-1α启动子、S基因和dhfr基因经测序与Genbank报道一致。真核表达载体pEF1-αS ...
张艳, 时成波, 郭丽, 范洪学
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 目的构建人类GPC3重组真核表达载体。方法以人类肝脏cDNA文库为模板扩增出GPC3基因序列,应用T克隆载体及pcDNA真核表达载体重构,将质粒转化进入HLE人肝癌细胞系,进行荧光免疫方法检测。结果 测序结果序列正确,荧光染色转染质粒的HLE细胞可见细胞浆和细胞膜上有GPC3的表达。结论成功构建真核表达载体pcDNA-GPC3,并在真核细胞中可以表达。
李莉 +4 more
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人乳头瘤病毒18型E6蛋白真核表达载体的构建及其在子宫颈癌细胞株Hela细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建并鉴定p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6真核表达载体,并转染Hela细胞后,检测其在Hela细胞中的表达。方法用RT-PCR法从Hela细胞中扩增出带HindⅢ、SalⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,将HPV18E6基因片段连接到pMD-18T载体上,通过限制性内切酶HindⅢ、SalⅠ酶切,T4连接酶连接到含有上述酶切位点的p3×flag-myc-CMV-24真核表达载体上,通过脂质体将p3×flag-myc-CMV-24-HPV18E6转染入Hela细胞48h后 ...
卫莹 +7 more
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人 CD134L 基因原核表达载体的构建、鉴定及序列分析 [PDF]
, 2002 【目的】克隆人 CD134L 的 cDNA,构建人 CD134L 的原核表达载体 pGEX-4T-1/hCD134L,并进行序列分析。【方法】以 EB 病毒 转化健康人外周血 B 淋巴细胞,从激活的EB 病毒转化的 B细胞中提取总 RNA,采用 RT-PCR 方法扩增出人CD134L cDNA,经 BamHⅠ和 Sal Ⅰ双酶切后,克隆入原核表达载体 pGEX-4T-1,构建高效表达载体 pGEX-4T-1/CD134L,经限制性内切酶酶切分析和 cDNA 序列分析鉴定重组质粒。【结果】人CD134L ...
张 强 +3 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建（BbxⅡ）基因真核表达载体,为研究家蚕素Ⅱ在哺乳动物细胞中的生物学作用奠定基础。方法以含有BbxⅡcDNA的PUC57质粒为模板,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增BbxⅡcDNA片段。真核表达载体PcD-NA3.1及PCR产物经双酶切后连接,转化大肠杆菌DH-5α感受态菌,获得重组载体PcDNA3.1-Bbx/His,进行酶切鉴定和测序鉴定。结果 PCR获得与预期大小一致约300 bp的特异性DNA,重组载体PcDNA3.1-BbxⅡ/His经双酶切及测序鉴定证实 ...
李洪霞 +5 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的探讨PAI的发卡样siRNA真核表达载体PAI siRNA对人肝癌HpG2细胞VEGF表达的影响。方法设计短发夹状PAI siRNA的寡核苷酸链,将其插入到真核细胞表达载体pSilencerTM 2.1-U6 neo载体中,构建的重组载体后;采用脂质体转染方法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、westernblot法分别检测转染细胞PAI mRNA和蛋白的表达变化以及对VEGF表达的影响。结果经测序证明PAI siRNA序列正确;转染PAI ...
杜建时, 赵晴, 张静菊, 王嘉桔
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丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L ...
陈佳玉 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建HSV-TK单基因和TK/hIL12融合基因的真核表达载体。方法 PCR扩增质粒pGT60-hIL12中HSV-TK与hIL12治疗基因片段,同时引入pcDNA3.1（+）多克隆酶切位点,构建HSV-TK单基因及其与hIL12融合基因的真核表达载体。结果 DNA测序分析、限制性双酶切鉴定证实构建的真核表达载体中治疗基因的序列、大小和方向正确。结论成功构建了pcDNA3.1-TK和pcDNA3.1-TK/hIL12真核表达载体,为进一步探索HSV-TK与hIL12基因的协同抗瘤作用提供实验基础。
杜晓媛 +5 more
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, 2013 基于四膜虫小核rDNA改造得到的pD5H8载体，在转染进接合生殖时期的四膜虫后能发育成9000～10000拷贝的大核rDNA，因此pD5H8载体是四膜虫异源基因表达的研究热点；但其载体上匮乏合适的克隆位点和无启动子结构阻碍了该载体的进一步发展。本研究在四膜虫启动子HSP70—2和终止子HSP70-I之间，通过稀有酶切位点I-SceI导入细菌绿色荧光蛋白NGFP）这一筛选标记，由此组成的DNA片段（HSP70-25’UTR．I-SceI—HGFP．I—SeeI—HSP70-13’UTR）整合进pD5H8 ...
冯立芳, 熊杰, 袁冬霞, 缪炜
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, 2003 目的 运用植物转基因技术 ,探索构建表达人类 β-防御素 - 2 ( h BD- 2 )的植物生物反应器的可能性及技术路线。方法 将 C端带 myc和 6x His双标记的重组 h BD- 2基因插入植物真核表达载体 p CAMBIA13 0 4中 ,构建 C端带 m yc和 6x His双标记的重组 h BD- 2植物真核表达载体 rp CAMBIA13 0 4/ h BD- 2 / His。利用此载体转化根癌农杆菌 L BA44 0 4,经卡那霉素进行抗性基因筛选和 PCR检测 ...
杜军 +5 more
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