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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2018 目的构建含EGFP标签的人β-神经生长因子（hβ-NGF）的真核表达载体,观察和分析其在HEK293细胞中的定位,为后续基因转移实验奠定基础。方法PCR扩增hβ-NGF基因编码框,连接到pEGFP-N1载体,将HEK293细胞分为对照组（不转染）、空载组（转染pEGFP-N1质粒）和实验组（转染pEGFP-N1-hβ-NGF质粒）,后两组采用脂质体法转染,24h后荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达及细胞定位,通过蛋白序列数据库和生物信息学软件进一步分析亚细胞定位。结果经双酶切和测序鉴定,pEGFP-N1 ...
杨智 +5 more
doaj
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建趋化因子受体4（CXCR4）的特异RNA干扰载体。方法在GenBank数据库查询CXCR4基因的登陆号为NM-003467。使用Invitrogen公司的在线设计软件Invitrogen′s RNAi Designer,设计miR RNAi,选择713这个位点设计成相应的Oligo DNA,退火DNA oligos生成双链oligos,应用T4DNA连接酶连接双链oligos与表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR。酶切鉴定和测序鉴定 ...
王海涛, 金宏林, 王莹, 金春顺
doaj
Studies on the Pathogenic Bacterium and the DNA vaccine of Ulcer Disease in cage-cultured Epinephelus awoara [PDF]
, 2005 弧菌病是海水鱼类养殖业中造成经济损失最严重的细菌性疾病，本论文致力于养殖石斑鱼弧菌病病原菌及DNA免疫防治的研究，主要结果如下：1、调查研究了2002年夏季厦门同安湾网箱养殖石斑鱼大面积暴发的溃疡病，对细菌病原进行分离纯化，编号为TS-628，回归感染证实这株菌是引发同安湾网箱养殖石斑鱼溃疡病的病原菌。采用生化鉴定的方法对病原菌进行初步鉴定，同时采用PCR技术获得病原菌16SrRNA基因一段长1121bp的序列，该序列登录基因库（序列号为AY747308 ...
覃映雪
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建含基因NLRC3的重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3。方法利用基因重组技术将NLRC3基因插入到真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA中,经酶切,PCR,测序及Western确定重组体质粒构建成功并转染。结果重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3构建成功。并将重组体转染至hUMSC细胞中并进行单克隆筛选扩增。结论重组真核载体pcDNA3.1/myc-hisA-NLRC3构建成功,并成功转染到hUMSC中,为下一步研究NLRC3的转染研究奠定基础。
宛莹, 张世冬, 梁爽, 聂德志
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术探索HIWI基因的作用的研究做准备。方法根据HIWI mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入pGenesil-2载体,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体中,经测序证明与设计相同。结论成功构靶向HIWI基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究HIWI基因在干细胞和肿瘤细胞中的作用机制及后续的体内外RNAi实验研究奠定了基础。
陈岐辉 +4 more
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Interaction between CHIP and PS1 [PDF]
, 2007 阿尔茨海默氏病(Alzheimerdisease,AD)是一种以渐进性记忆力丧失和认知障碍为主要症状的神经退行性疾病，在患者脑部出现两个明显的病理组织学特征：即细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillarytangle,NFT)和细胞外形成淀粉样斑（senileplaque,SP）。一小部分的AD由基因突变所致，并可在家族内遗传，这部分AD患者较早就出现AD相关病理特征，故又被称为早发型家族性AD（earlyonsetfamilialAD，EOFAD）；其中早老素1（presenilin1,PS1）
易雪莲
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】为探索共刺激分子 B7-1 增强 HBsAg 真核表达载体基因免疫的效果,并用于消除乙肝免疫耐受。【方法】 用高保真 PCR 法扩增目的基因片段 B7-1 及带接头和启动子的 IRES-HBs 基因片段,亚克隆到 pBluescript KS+载体中测序,再 克隆到逆转录病毒载体 PLXSN 中。【结果】所扩增的目的基因片段经测序证实, 未发现序列有改变。先将 B7-1 通过 EcoR Ⅰ 、Xho Ⅰ插入 plxsn 中,构建成 plxsn-B7-1, 再用 Xho Ⅰ 、 BamHⅠ将 ...
周 智 +4 more
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PS1 Interaction with CHIP and regulate the cellular level of tumor suppressor PTEN [PDF]
, 2010 阿尔茨海默氏病(Alzheimerdisease，AD)是一种以渐进性记忆力丧失和认知障碍的神经退行性疾病，患者脑部有两个明显的病理学特征：即细胞内神经原纤维缠结(neurofibrillarytangle，NFT)和细胞外形成淀粉样斑（senileplaque，SP）。大量的研究结果表明：部分的AD由基因突变引起，并在家族内遗传，其临床症状表现为较早出现AD相关病理特征，因此又称做早发型家族性AD（early onsetfamilialFAD）；其中早老素1（Presenilin1，PS1）/早老素2（
刘润忠
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建调控人核心蛋白聚糖基因特异性在肺癌细胞A549内表达的基因表达载体,为进一步应用该基因进行肺癌靶向治疗的研究奠定实验基础。方法应用PCR技术从人外周血基因组中扩增肺癌细胞特异性表达的人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂的启动子,利用基因重组技术将该启动子插入真核细胞表达载体pcDNA3.1（+）,替换该载体的CMV启动子与增强子序列,从而构建成由人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因的启动子启动基因表达的基因表达载体。将人核心蛋白聚糖基因通过基因重组技术插入到上述载体人分泌型白细胞蛋白酶抑制剂基因启动子的下游 ...
吕俊锋 +3 more
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p38β Phosphorylates Raptor to Regulate mTORC1 Activity [PDF]
, 2010 哺乳动物雷帕霉素靶点蛋白（mTOR）是一个控制细胞生长的丝氨酸/苏氨酸激酶，除了对生长因子、氨基酸和能量有反应，同时也对应激信号有反应。构架蛋白Raptor与mTOR结合，为其募集下游底物进入雷帕霉素敏感的mTORC1。Raptor对于mTORC1的活性是关键的，虽然人们对Raptor的磷酸化修饰早有所知，但是参与其中的大多数上游激酶还不为人知。 本文中我们发现，在亚砷酸钠刺激情况下Raptor可以在丝氨酸残基863位和771位被p38β特异性磷酸化修饰。利用了p38α/β/γ/δ四种条件性敲除细胞 ...
吴晓男
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