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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建pEGFP-N1/BMP-2真核表达质粒,并进行鉴定。方法利用RT-PCR方法从组织中提取骨形态发生蛋白（BMP-2）的基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T/BMP-2重组质粒,酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1/BMP-2真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。结果通过测序、酶切鉴定,证明pMD18-T/BMP-2质粒构建成功。结论本实验成功构建了pEGFP-N1/BMP-2真核表达质粒,为进一步研究利用BMP ...
张明磊 +4 more
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Roles of AC-cathB-1, a Cathepsin B-like Cysteine Protease of Angiostrongylus cantonensis, in Host Gut Invasion [PDF]
, 2015 广州管圆线虫是引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎和脑膜脑炎的主要病原生物，该病也因此被命名为广州管圆线虫病。广州管圆虫属于管圆线虫属，中间宿主为软体动物，终末宿主为啮齿类动物，人因误食未煮熟的携带其第三期幼虫（L3）的软体动物而意外感染，L3污染的其他食物或水源也可导致感染。近年来，随着人们饮食习惯的改变和水陆交通日趋发达，该病的流行呈上升趋势。然而，我们在其诊断和治疗方面仍缺乏有效手段，因此对其的进一步研究很有必要。 小肠壁作为机体防御病原体入侵的天然屏障之一 ...
龙瀛
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建人紧密连接蛋白claudin-6的cDNA真核表达载体。方法应用RT-PCR、T-A克隆、限制性内切酶切及亚克隆等技术将claudin-6基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结果酶切鉴定、PCR扩增以及序列分析表明已经将claudin-6基因全长序列克隆入真核表达载体pcDNA3.1（+）质粒中。结论获得了人claudin-6基因的全长cDNA片段,构建了claudin-6原核克隆载体和真核表达载体。实验中发现,中国人claudin-6基因的461位点碱基为A ...
吴琼 +7 more
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Functional expression of SCN5A mutation R1628Q associated with Brugada syndrome [PDF]
, 2013 目的 体外构建含R1628Q突变的人心脏钠离子通道α亚基真核表达载体pHL-hH1-R1628Q。研究R1628Q突变对钠通道电生理性质的影响，阐明Brugada综合征的发病机制，为疾病的基因诊断和分子治疗提供新的思路。 方法 设计带突变位点的引物，以含有人心脏钠离子通道cDNA的质粒为模板经重叠延伸PCR法体外定点诱变，构建R1628Q突变型人心脏钠离子通道真核表达载体。经酶切和DNA测序验证后与心脏钠离子通道β1亚基质粒pEGFP-N3-SCN1B瞬时共同转染到HEK293 ...
曾志鹏
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丙肝核心抗原-CD40L胞外段真核表达载体的构建及其免疫原性分析
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2013 目的构建丙肝核心抗原-CD40L胞外段融合蛋白真核表达载体,并探讨其免疫原性。方法应用基因重组技术在原有载体的基础上构建真核表达载体pcDNA3.1-core-CD40L并加以鉴定。该表达质粒肌肉内注射免疫小鼠,ELISA法检测小鼠外周血中抗丙肝核心抗体,流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚型,real time PCR法检测外周血单个核细胞内细胞因子,CTL杀伤实验检测小鼠脾淋巴细胞的杀伤活性。结果构建了真核表达载体pcD-NA3.1-core-CD40L ...
陈佳玉 +4 more
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Studies on the regulation of membrane microdomains (lipid rafts) / Flot to mitogen-activated protein kinase signaling pathway and its effect on reversing multidrug resistance of hepatocellular carcinoma cells [PDF]
, 2015 目的： 1.构建耐药肝癌细胞模型。 2.检测Flot下调对ERK1/2信号通路的影响，明确能否通过Flot调控ERK1/2信号通路从而实现肝癌细胞耐药性的逆转。 3.检测脂筏破坏剂甲基-β-环糊精破坏脂筏结构对ERK1/2的影响，探索脂筏与ERK1/2之间的关联。 4.检测下调Flot对耐药肝癌细胞侵袭能力的影响。 5.构建过表达质粒Flot1/pcDNA3.1（+）、Flot2/pcDNA3.1（+），为后续研究工作奠定基础。 方法： 1.用阿霉素大剂量冲击法诱导细胞，Celltiter ...
王亚丽
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Preparation and Application of Soluble Human Squamous Cell Carcinoma Antigen Expressed by Escherichia coli [PDF]
, 2017 旨在建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达人鳞状上皮细胞癌抗原(SCCAg)方法,获得具有较好活性的重组SCCAg抗原并应用于建立抗原检测方法; 。基于pGEX-6P-l载体和大肠杆菌E. coli; ER2566菌株开展重组SCCAg抗原可溶性表达纯化方法研究,评价纯化抗原活性,筛选特异性单克隆抗体,初步建立并评价SCCAg抗原检测方法。结果; 显示,pGEX-6P-l载体和E coli; ER2566菌株可用于建立较高效的可溶性表达和纯化SCCAg抗原的方法 ...
刘剑 +9 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2005 目的 构建表达反义血管内皮生长因子165（VEGF165）的真核表达载体,观察其对人乳腺癌细胞MCF- 7的影响,探讨反义基因治疗乳腺癌的可行性。方法 应用基因重组技术,将人VEGF165cDNA反向克隆入pcDNA3真核表达载体中,构建VEGF165反义基因的真核表达载体,将此表达载体转染人乳腺癌细胞MCF -7,观察转染前后MCF 7的VEGF165表达及细胞生长周期。结果 成功构建出VEGF165反义RNA真核表达载体,反义质粒转染后MCF -7细胞VEGF165表达下降,G1期细胞增加 ...
李国栋, 宋燕, 刘力华, 段秀梅
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pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体的构建及在C6细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王海东 +5 more
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小鼠Neuronatin基因真核表达载体构建及其蛋白产物的检测
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2008 【目的】 构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP*9鄄N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白65377; 【方法】 RT*9鄄PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中的定位,Western blot检测其在真核细胞中的表达65377;【结果】 RT*9鄄PCR法扩增出Nnat基因的两种亚型,相应的双酶切能够获得插入的目的基因片断,测序分析未发现突变 ...
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