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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的探讨PAI的发卡样siRNA真核表达载体PAI siRNA对人肝癌HpG2细胞VEGF表达的影响。方法设计短发夹状PAI siRNA的寡核苷酸链,将其插入到真核细胞表达载体pSilencerTM 2.1-U6 neo载体中,构建的重组载体后;采用脂质体转染方法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、westernblot法分别检测转染细胞PAI mRNA和蛋白的表达变化以及对VEGF表达的影响。结果经测序证明PAI siRNA序列正确;转染PAI ...
杜建时, 赵晴, 张静菊, 王嘉桔
doaj
Oral immunization studies relied on the live attenuated bacteria in vivo expressing antimicrobial peptides AS-prohepc2 and Scy1 in fish [PDF]
, 2015 抗菌肽是鱼、虾、贝等非特异性免疫防御系统的主要成分之一，在防御外源性病原体入侵方面起着重要作用。作为一类独特的天然免疫活性物质，抗菌肽具有广谱的抗微生物活性和免疫调节活性。迄今从鱼类、甲壳动物、贝类等海洋动物中已分离获得了多种不同类型的抗菌肽，并揭示了其基因和蛋白结构以及表达特性、抗微生物活性以及某些抗菌机理；现有试验结果亦逐渐证明抗菌肽有望作为抗生素一定程度的替代品，在水产养殖业及其他行业具有应用前景，但迄今对其有效利用途径且进入机体后的免疫效应知之甚少。 天然运载载体（如细菌、病毒和哺乳动物细胞等 ...
陈贝
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建（BbxⅡ）基因真核表达载体,为研究家蚕素Ⅱ在哺乳动物细胞中的生物学作用奠定基础。方法以含有BbxⅡcDNA的PUC57质粒为模板,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增BbxⅡcDNA片段。真核表达载体PcD-NA3.1及PCR产物经双酶切后连接,转化大肠杆菌DH-5α感受态菌,获得重组载体PcDNA3.1-Bbx/His,进行酶切鉴定和测序鉴定。结果 PCR获得与预期大小一致约300 bp的特异性DNA,重组载体PcDNA3.1-BbxⅡ/His经双酶切及测序鉴定证实 ...
李洪霞 +5 more
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Construction of eukaryotic vector pcDNA3.1-flag-pygo2 and expression in C6 cell [PDF]
, 2008 目的构建pcDNA3.1-flag-pygo2真核表达载体并在C6细胞中进行表达。方法从小鼠脑胶质细胞中提取总RNA,RT-PCR法反转录合成c DNA,设计引物,调取目的片段,与pcDNA3.1-flag载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB平板筛选菌落,提取质粒。重组质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经过酶切鉴定及测序后,阳离子脂质体法转染C6细胞并经免疫细胞化学染色及蛋白印迹检测重组体的表达。结果重构质粒pcDNA 3.1-flag-pygo2经限制性核酸内切酶EcoRⅠ ...
王占祥 +5 more
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两种不同来源的EBV LMP1 基因在Balb/c 3T3 细胞中的表达
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】研究来源于鼻咽癌细胞株SUNE1 及EBV 标准株B95 -8 细胞中两种EBV LMP1 基因在真核细胞Balb/c 3T3 中的表达, 为进一步研究EBV LMP1 基因的核酸疫苗打基础。【方法】将两种不同来源EBV LMP1 基因的真核表达质粒, 经 脂质体法转染Balb/ c 3T3 细胞后, 用Western blot、免疫组化及PCR 的方法检测不同转染细胞中EBV LMP1 蛋白的表达及核酸片 段。【结果】PCR 结果表明在两种不同来源LMP1 转染细胞中均有EBV LMP1
陈 元 +3 more
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Constructhion and Eukaryotic Expression of FBXW7α and Effects On Migrationof Cholangiocarcinoma Cell [PDF]
, 2015 胆管癌是起源于胆管上皮的一种恶性肿瘤，近年来在全球的发病率逐年升 高，目前占据消化道肿瘤的3%,胆管癌患者5年生存率不足5%；并且这一状况 30年未曾改变。由于起病隐匿，发现比较困难，手术效果并不理想；为此我们 寄希望于采取新一代的基因诊断提高发现率；有人对人类多种肿瘤做了基因突变 测定，发现FBXW7在胆管癌中突变率较高。FBXW7有三种亚型，分别为FBXW7 α、FBXW7β和FBXW7γ；FBXW7α含有一个F-box基序，该基序直接与Skp 蛋白结合构成完整的SCF(Skp-cullin-F ...
翁中海
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建MYCT-1（myc target）基因真核表达载体,观察其转染胃粘膜GES-1细胞系后的表达。方法用RT-PCR法合成MYCT-1 cDNA,克隆至表达载体pcDNA3.1上,测序验证无突变发生。将表达载体转染GES-1细胞,用RT-PCR和Western blot检测MYCT-1基因的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实成功克隆了MYCT-1 cD-NA全长并正确插入了表达载体,在GES-1细胞中检测到MYCT-1 mRNA和蛋白。结论成功构建了MYCT-1真核表达载体,可在GES ...
梅旭, 刘政, 邱广斌
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含副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus) Fla I基因真核表达重组质粒的构建 [PDF]
, 2002 用ClaⅠ /EcoRⅠ双酶切带有副溶血弧菌 (Vibrioparahaemolyticus)极鞭毛蛋白FlaI基因的质粒pMD18 FlaI,回收目的基因片段 ,插入到真核细胞表达载体pIRESneo同样经ClaⅠ /EcoRⅠ切开的窗口中 ,成功地将FlaI克隆到pIRESneo中 ,获得有意义的重组质粒pIRESneo FlaI.构建的pIRESneo FlaI真核表达重组质粒 ...
丁少雄 +5 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2000 【目的】构建含乙型肝炎病毒(HBV)编码核心蛋白(HBcAg)的核心(C)基因的真核表达重组体, 以进行核酸免疫及 相关研究。【方法】以含HBV(ayw 亚型)全基因序列的质粒pHBV1 为模板, 用PCR 的方法获得编码HBcAg 的C 基因片段 (nt1889 ～ 2457), 该基因片段两端设计了BamH Ⅰ 和EcoRⅠ 的限制性内切酶位点, 以便通过定向克隆将其插入真核表达质粒 载体pcDNA3 相应的多克隆位点。【结果】经BamH Ⅰ 和EcoRⅠ 酶切后琼脂糖凝胶电泳鉴定 ...
韦 嘉 +4 more
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基于立即早期蛋白IE62建立水痘-带状疱疹病毒感染性滴度检测方法 [PDF]
, 2018 目的:基于水痘-带状疱疹病毒(VZV)立即早期蛋白IE62与酶联免疫斑点检测技术(ELISpot)建立一种新型的VZV感染性滴度的快速检测方法。方法:应用生物信息学方法设计并合成VZV-IE62蛋白的多肽抗原,牛血清白蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,筛选和制备抗VZV-IE62单克隆抗体,应用Western blot和免疫荧光法等开展抗体性能评价,继而应用酶联免疫斑点技术(ELISpot)结合生物素-亲和素放大法建立新型的VZV感染性滴度检测方法,并与经典空斑计数法进行比较。结果:获得抗VZV ...
付文锟 +7 more
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