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RNA 干扰 mPGES-1 基因对 K562/A 细胞增殖及凋亡的影响
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2020 【目的】探讨RNA干扰膜结合型前列腺素E2合酶1（mPGES-1）对阿霉素耐药的人红白血病细胞株K562/A细胞增殖、凋亡及耐药性的影响及其可能的机制。【方法】通过RNA干扰技术抑制K562/A细胞中mPGES-1表达。分组：①未处理组（K562/A），②干扰后的阴性对照组（K562/A-NC），③干扰组（K562/A-KD），④干扰后加入外源性PGE2组（K562/A-KD+PGE2）；CCK-8法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡；ELISA法检测PGE2浓度；Western blot检测蛋白水平。
邱梦 +7 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建并筛选到能有效抑制TLR4基因表达的小干扰RNA表达载体,用于研究TLR4基因功能。方法 RNA干扰采用体外构建小干扰RNA表达载体法,将构建好的表达载体转染单核细胞株,分别用流式细胞术和实时荧光定量RT-PCR法检测TLR4蛋白和mRNA表达变化,筛选抑制效率最高的小干扰RNA表达载体。结果成功构建了TLR4小干扰RNA表达载体,并经电泳及测序证实;编号为S8-1的载体转染入细胞后,TLR4阳性率为27.03%,显著低于对照组的35.12%;流式细胞术和实时荧光定量RT ...
耿红莲 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2017 【目的】探讨线粒体未折叠蛋白反应（UPR mt ）对阿尔茨海默病（AD）Aβ蛋白聚集毒性的影响。【方法】将秀丽线 虫（Caenorhabditis elegans）线粒体外膜tomm-22、内膜E04A4.5以及atfs-1基因克隆并构建L4440干扰载体，转化HT115感受 态细胞以制备 tomm-22、E04A4.5 和 atfs-1 RNA 干扰菌。研究 tomm-22 和 E04A4.5 RNA 干扰对转基因线虫 AD 疾病模型 CL4176和CL2006瘫痪进程的影响。观察tomm ...
赵思旭 +3 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2012 RNA干扰是细胞利用21-23nt双链RNA介导的转录后同源mRNA沉默的现象[1]。由于具有高度特异性和有效性,RNA干扰被广泛用于HIV、HCV、流感病毒等功能性基因的研究中。基于逆转录环节在HBV复制中的重要作用,一些学者已经证实RNA干扰可以通过沉默病毒基因来抑制HBV复制[2,3 ...
李静红 +4 more
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Syndecan1慢病毒干涉质粒的构建及其对舌鳞癌CAL27细胞增殖的影响
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2015 目的探讨RNA干扰Syndecan1基因对舌鳞癌CAL27细胞增殖的影响,阐明其作用机制。方法构建靶向基因Syndecan1的siRNA载体重组质粒pDSL-hpUGIP-Syndecan1-1834、pDSL-hpUGIP-Syndecan1-1588、pDSLhpUGIP-Syndecan1-544作为RNA干扰质粒组,同时设立阴性对照质粒组(pDSL-hpUGIP-control siRNA质粒);采用荧光定量PCR检测Syndecan1mRNA的表达水平和表达抑制率 ...
王晓峰, 孔晨飞, 王伟, 张天夫
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pSiRNA-Shh逆转录病毒载体的构建及对恶性脑胶质瘤细胞作用的离体实验研究
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的建立逆转录病毒介导的人Shh基因RNA干扰体外表达体系并观察对恶性脑胶质瘤细胞的作用。方法将人Shh基因RNA干扰双链转录DNA片段重组到逆转录病毒质粒Psilencer 5.1-H1 Retro中,构建成携带人Shh基因RNA干扰逆转录病毒载体pSiRNA-Shh,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染恶性脑胶质瘤细胞株U251和CHG-5细胞,用WST-8、RT-PCR和Western Blotting分别检测对转染细胞活性、人Shh mRNA和蛋白表达的影响。结果重组pSiRNA ...
尹昌林 +5 more
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Zhongguo cuzhong zazhi目的 探究甲基转移酶3（methyltransferase 3，METTL3）对人脑血管平滑肌细胞（human brain vascular smooth muscle cells，HBVSMC）基因表达以及增殖和迁移功能的影响。 方法 采用小干扰RNA（small interfering RNA，shRNA）干扰技术，构建METTL3基因干扰载体并通过腺病毒感染HBVSMC，依据感染情况将其分为空白组（无病毒感染）、对照组（空载病毒感染）和干扰组（METTL3-shRNA病毒感染 ...
孟晨曦1，孙洪英2，张佳2，毛戬2，杨阳3，策乐木格3 (MENG Chenxi1, SUN Hongying2, ZHANG Jia2, MAO Jian2, YANG Yang3, Celemuge3 )
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的评价靶向Hiwi基因的shRNA表达载体的干扰效果。方法通过构建靶向Hiwi基因的短发夹RNA（shout-hairpin RNA,shRNA）真核表达载体pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263,并以pGenesil-2-control为阴性对照,转染膀胱癌T24细胞,从mRNA和蛋白水平观察3种干扰载体的干扰效率。结果pGenesil-2-Hiwi1和pGenesil-2-Hiwi2263组膀胱癌T24细胞Hiwi mRNA与GAPDH灰度比值较Normal ...
陈岐辉 +4 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建靶向增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）的RNA干扰质粒载体。方法设计并合成针对EGFP编码区的模板寡核苷酸单链,克隆入pSilencerTM 3.1-H1 neo载体中,对重组质粒进行酶切鉴定和DNA序列测定。结果重组质粒经限制性内切酶酶切得到66 bp和4.3 kb条带;重组阳性克隆测序结果与实验设计的模板寡核苷酸序列相符。结论成功构建靶向EGFP的RNA干扰表达载体,为RNA干扰技术在实验室的进一步开展奠定基础。
干惠珠 +5 more
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Cdc42-shRNA表达载体的构建及在肝癌细胞株的沉默效果
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建Cdc42-shRNA真核表达载体。方法合成Cdc42的基因干扰序列并定向插入到RNA干扰（RNAi）真核表达载体pGenesil-1质粒,通过测序进行鉴定。干扰质粒经脂质体Lipofectamine2000介导转染肝癌细胞,Westernblot方法检测沉默效率。结果测序证明干扰序列完全正确,Westernblot结果显示Cdc42-shRNA对肝癌细胞株内源性Cdc42有较好的沉默效果。结论成功构建了Cdc42-shRNA真核表达载体,为进一步研究Cdc42在基因治疗中的作用奠定基础。
解英俊 +3 more
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