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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的在人骨髓间充质干细胞内大量稳定的表达人白血病抑制因子（human Leukemia Inhibitory Factor,hLIF）。方法应用RT-PCR方法从人蜕膜组织中扩增出白血病抑制因子,并将其构建于pcDNA3.1真核表达载体上。利用脂质体进行基因骨髓间充质干细胞的转染。利用G418进行基因的稳定表达筛选。通过RT-PCR和Western blot方法进行基因表达的检测。结果成功扩增出人白血病抑制因子基因,成功构建hLIF-pcDNA3.1真核表达载体。转染LIF-pcDNA3 ...
杨春辉, 杜珍武, 杨光, 尹维田
doaj
绿色荧光蛋白基因 gfp 真核表达载体 pcTKGFP 的构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 1999 目的: 构建携带绿色荧光蛋白基因( gfp)的真核表达载体 pcTKGFP,为利用绿色荧光蛋白标记在实验动物体内进 行自杀性基因治疗的研究和转基因动物打靶载体的构建提供基因材料。方法: 采用 PCR 技术从商品质粒 pEGP -C1 中扩增出 gfp( 799 bp) ,PCR 产物用 XbaⅠ和 BamH Ⅰ双酶切后定向克隆至真核表达载体 pcTK, 重组质粒 pcTKGFP 用限制性内切酶和 DNA 序列分析进行鉴定。结果: 部分 DNA 序列分析证明 PCR 产物为 gfp, 成功筛选到携带 ...
doaj
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒，探讨抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。【方法】用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织扩增抵抗素基因cDNA，A／T克隆于pGEM-T载体，再亚克隆于pcDNA3．1（＋）和pcDNA3．1（-）真核表达载体，构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒pcDNA3．1^（＋）resistin和pcDNA3．1^（-）-resistin^（-）。将pcDNA3．1^（-）resistin^（-
李芳萍 +4 more
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Study on the abnormal expression of the transcription factor FoxO3a and its mechanism in chronic myelocytic leukemia [PDF]
, 2011 背景：慢性粒细胞白血病(ChronicMyelocyticLeukemia，CML)是一种致命性的恶性造血干细胞疾病，发生源于人9号和22号染色体的易位，导致费城染色体t(9;22)(q34;q11)和融合蛋白P210BCR/ABL的形成。P210BCR/ABL显示异常增强的酪氨酸激酶活性，过度激活下游Ras、PI3K/Akt等信号通路导致肿瘤的发生。FoxO蛋白家族作为转录因子通过调节细胞内多种重要基因的表达，而介导细胞周期、DNA损伤修复、凋亡、氧化应激、细胞分化代谢等细胞生理过程 ...
杜艳
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建靶向EZH2基因的shRNA真核表达载体质粒,为利用RNA干扰技术探索EZH2基因的作用的研究做准备。方法根据EZH2 mRNA序列设计并合成shRNA寡核苷酸片段,退火形成双链并连接入pGenesil-2载体,并进行酶切鉴定和测序。结果酶切证明构建的shRNA已插入载体中,经测序证明与设计相同。结论成功构建靶向EZH2基因的shRNA真核表达载体,为进一步研究EZH2基因在肿瘤细胞中的作用机制及后续的体内外RNAi实验研究奠定了基础。
卢绩 +6 more
doaj
Expression，Purification and Activity Identification of Human Immunodeficiency Virus Recombinant Envelope Protein gp140 [PDF]
, 2012 艾滋病（AIDS）自1981年被发现以来，便在世界范围内迅速蔓延，越来越多的人被人类免疫缺陷病毒（HIV）感染，人类健康和社会都受到了极大的危害。对HIV的有效控制、预防及治疗是人类迫切想要解决的问题。HIV的包膜蛋白含有HIV最重要的抗原成分，同时也是其构成成分中最容易变异的组分，对于HIV诊断试剂、中和抗体和疫苗的研究都至关重要，长期以来一直是HIV的研究热点。然而HIV包膜蛋白的糖基化程度很高，且很难分泌表达，这些都不利于蛋白的获取，对其结构和功能的研究工作造成了阻碍 ...
刘彦宁
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】研究bcl-2 基因(bcl-2)在PC12 细胞中的表达。【方法】构建真核表达载体pcDNA3-bcl-2 , 采用脂质体介 导将重组质粒导入PC12 细胞, Western blo t 和原位免疫组化检测外源基因表达。【结果】本实验成功构建了真核表达载体 pcDNA3-bcl-2, 并用脂质体介导的方法获得了稳定表达bcl-2 的细胞克隆;Western blo t 显示有26 ku 的蛋白质表达, bcl-2 单克 隆抗体免疫组化染色呈阳性反应。【结论】重组质粒pcDNA3-bcl ...
吴永青
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Approaches to fish DNA vaccine study [PDF]
, 2005 福建省自然科学基金(B0410022);; 福建省青年创新基金 ...
庄峙厦 +4 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2018 【目的】建立稳定miR-18a过表达及表达的人鼻咽癌细胞系，为研究miR-18a在鼻咽癌发生发展中 的功能奠定基础。【方法】将miR-18a前体的编码基因片段及miR-18a反义寡核苷酸克隆到慢病毒载体中，DNA 测序鉴定；将构建好的载体转染293T细胞，获得重组miR-18a过表达及抑制表达的慢病毒载体，感染人鼻咽癌细 胞CNE1和CNE2，嘌呤霉素筛选获得稳定干扰miR-18a表达及过表达miR-18a的细胞系，PCR及western blot鉴 定。【结果】成功构建真核表达的慢病毒miR ...
常利红 +5 more
doaj
Biological effects of Axin gene expression in glioma C6 cells [PDF]
, 2006 目的研究Axin基因对神经胶质瘤细胞C6生物学特性及相关蛋白的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。应用末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察细胞凋亡及比率。采用免疫细胞化学染色法检测Ki67、CyclinD1、p53的表达。结果转染Axin基因使细胞周期在G1期阻滞;细胞增殖能力和细胞克隆形成能力均显著降低;细胞凋亡率增高;Ki67及CyclinD1低表达,p53高表达 ...
叶菁 +6 more
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