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以β-淀粉样蛋白为靶的单价及二价真核表达载体的构建和表达 [PDF]
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2006 【目的】构建以β-淀粉样蛋白为靶单价及二价真核表达载体pcDNA3．1-Aβ1-42、pcDNA3．1-AB42x，并在真核细胞中表达目的蛋白。【方法】PCR法扩增编码B一淀粉样蛋白的目的基因，利用基因克隆技术构建单价及二价真核表达载体；应用酶切及测序鉴定真核表达载体构建成功后，用Western blot和细胞免疫组化染色检测其在真核细胞中的表达。【结果】相应的双酶酶切能够获得插入的目的基因片段（分别为137bp和269bp），测序未发现突变；Western blot结果可见两条约为4ku和8ku的条带，
王烈峰 +6 more
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Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2007 【目的】构建以基因佐剂hGM-CSF基因为基础的真核表达质粒pIGM-CSF,并在宫颈癌细胞HeLa中表达与鉴定。【方法】采用聚合酶链反应从载体pORF-hGM-CSF中,扩增出hGM-CSF基因,克隆到双顺反子真核表达载体pIRES的多克隆位点B（MCSB）中,构建pIGM-CSF真核表达载体。然后采用脂质体转染法将其转染HeLa细胞,用RT-PCR在RNA水平和ELISA在蛋白水平检测其在真核细胞中的表达。【结果】所克隆hGM-CSF基因片段经测序完全正确;重组质粒转染Hela细胞后,检测有hGM ...
卢燕茹, 江振友
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Functional expression of SCN5A mutation R1628Q associated with Brugada syndrome [PDF]
, 2013 目的 体外构建含R1628Q突变的人心脏钠离子通道α亚基真核表达载体pHL-hH1-R1628Q。研究R1628Q突变对钠通道电生理性质的影响，阐明Brugada综合征的发病机制，为疾病的基因诊断和分子治疗提供新的思路。 方法 设计带突变位点的引物，以含有人心脏钠离子通道cDNA的质粒为模板经重叠延伸PCR法体外定点诱变，构建R1628Q突变型人心脏钠离子通道真核表达载体。经酶切和DNA测序验证后与心脏钠离子通道β1亚基质粒pEGFP-N3-SCN1B瞬时共同转染到HEK293 ...
曾志鹏
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Construction of the eukaryotic expression vector pIRES2-EGFP-Axin and its expression in glioma cells [PDF]
, 2005 目的:构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,并在神经胶质瘤细胞系C6中进行表达。方法:用PCR的方法扩增Axin基因,构建真核表达载体pIRES2EGFPAxin,经NheI及SalI双酶切鉴定并测序。通过脂质体法转染C6细胞,用荧光显微镜检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,用免疫组化染色的方法检测细胞中Axin的表达。结果:构建了真核表达载体pIRES2EGFPAxin,用脂质体法转染神经胶质瘤细胞C6后,经荧光显微镜和免疫组化染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论:
叶菁(第四军医大学西京医院病理科) +6 more
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拟穴青蟹抗菌肽SCY2在毕赤酵母中的表达及其抗菌活性 [PDF]
, 2018 为深入研究拟穴青蟹Scylla paramamosain阴离子抗菌肽SCY2的抗菌活性,将抗菌肽SCY2的成熟肽序列与毕赤酵母Pichia pastoris的p PIC9K质粒连接,构建了分泌型表达载体p PIC9K-SCY2,用电击法将其转化至毕赤酵母GS115菌株中,经甲醇诱导表达和亲和纯化后获得目的蛋白,并进行质谱鉴定和抗菌活性分析。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/p PIC9K-SCY2,用0.5%甲醇诱导表达24 h后,分泌表达上清液中获得了相对分子质量约11 ...
刘杰, 彭会, 陈慧芸
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Construction of expression vector of HCV NS4B and its effect on cell apoptosis [PDF]
, 2017 目的 构建丙型肝炎病毒（HCV）2a型非结构蛋白4B（NS4B）的真核表达载体,并观察其对骨肉瘤细胞U2OS凋亡的影响。方法 以质粒PJFH1为模板,通过PCR反应扩增4目的基因片段,采用同源重组法与PCMV-tag2b载体相连,转化大肠杆菌感受态DH5α,筛选正确的克隆。以脂质体为介导转染U2OS细胞,通过Western blot检测NS4B蛋白的表达,免疫荧光检测细胞的凋亡。结果 构建pCMV-tag2b-NS4B重组质粒,经测序其与NCBI公布的序列完全一致,并可在U2OS细胞中表达 ...
任来峰 +7 more
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The optimized expression technology of marine animal-sourced antimicrobial peptides in Pichia pastoris and the development of antimicrobial peptide as feedstuff additive [PDF]
, 2015 抗生素污染问题是目前影响我国水产养殖业可持续健康发展的重大科技问题，抗生素（antibiotics）作为常用抗菌药物，被广泛应用于水产养殖业，但是抗生素超标所引起的细菌耐药性问题已成为全球公共健康问题，因此寻找抗生素的有效替代品是目前国内外本领域的研究热点之一。抗菌肽（antimicrobialpeptide）是先天性免疫的重要组分，广泛存在于生物界的各个门类，进化上相对保守，具有广谱抗菌活性、且不会产生细菌耐药性，被预言为最有希望替代抗生素的天然药物，具有广阔的应用前景 ...
彭会
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Study on the Molecular Mechanisms of dlk1 Stimulated Lung Cancer Cell Proliferation [PDF]
, 2010 Background and objective The imprinted gene dlk1 has been recognized as a cancer related gene since it aberrantly expressed in a series of cancer tissues, but its role in lung cancer is still unknown. The aim of this study is to examine dlk1’s expression
Bing LING +10 more
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皱纹盘鲍HdhTPX2基因在毕赤酵母中的表达及抗氧化活性研究 [PDF]
, 2019 为研究皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino硫氧还蛋白过氧化物酶（TPX2）蛋白的抗氧化活性,将HdhTPX2基因克隆至pPIC9K载体,通过电击转化至毕赤酵母GS115菌株中,获得重组表达质粒pPIC9K-HdhTPX2,经甲醇诱导及亲和层析纯化得到重组HdhTPX2蛋白,并进行质谱鉴定及体外抗氧化功能检测。结果表明:本研究中成功构建了重组毕赤酵母菌株GS115/pPIC9K-HdhTPX2,经表达条件的优化,在pH为7的培养基中用0.5%甲醇诱导表达72 h ...
乔琨 +9 more
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2007 目的构建HBsAg真核表达载体,转染CHO细胞并检测其表达。方法通过PCR法扩增出乙肝表面抗原的S基因和dhfr基因,分别克隆到T载体上,然后分别将S基因和dhfr基因克隆到pCI载体上,将pCI载体的CMV启动子替换为hEF-1α启动子。对新构建的pEF1-αS-dhfr真核表达载体进行酶切和测序鉴定。用脂质体法转染CHO（dhfr-）细胞,并用ELISA法检测HBsAg表达。结果hEF-1α启动子、S基因和dhfr基因经测序与Genbank报道一致。真核表达载体pEF1-αS ...
张艳, 时成波, 郭丽, 范洪学
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