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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建核转录因子κB抑制蛋白激酶（inhibitor of kappa B kinase,IKK）β真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从人正常肝细胞L02中提取RNA,并利用IKKβ特异性引物通过RT-PCR方法扩增了IKKβcD-NA,并克隆入pcDNA3载体中,构建重组载体pcDNA3-IKKβ。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测IKKβ的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示 ...
张冬梅 +6 more
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人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建
Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban, 2002 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA ...
杜柳涛, 高 昆, 何 云
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Effect of Trefoil factor 1 on induced expression of intercellular adhesion molecule 1 and vascular cell adhesion molecule 1 [PDF]
, 2009 研究目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TumorNecrosisFactor-α，TNF-α）刺激后胃黏膜上皮细胞GES-1细胞间粘附分子1(Intercellularadhesionmolecule1，ICAM1)、血管细胞黏附分子1（Vascularcelladhesionmolecule1，VCAM1）表达变化，以及TFF1（Trefoilfactorfamily1，TFF1）过表达对GES-1细胞中TNF-α诱导的ICAM1、VCAM1表达的影响。 研究方法：以永生化的胃黏膜上皮细胞株GES ...
杨晓宁
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激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体的构建及表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2009 目的构建激活素受体相互作用蛋白（activin receptor interacting protein zip,ARIPzip）真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从小鼠成纤维细胞3T3中提取RNA,并利用ARIPzip特异性引物通过RT-PCR方法扩增了ARIPzip cDNA,并克隆入pcDNA-Flag载体中,构建重组载体pcDNA-F-ARIPzip。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测ARIPzip的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功 ...
裴颖 +7 more
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Affinity Maturation of Humanized Atibody Against Highly Pathogenic Avian Influenza Virus [PDF]
, 2011 本实验室在前期工作中筛选获得了一株针对高致病性禽流感(H5N1)的广谱中和鼠源单抗13D4，对其进行了嵌合抗体和人源化抗体的改造。血凝抑制试验(HI)和细胞中和实验已证实嵌合抗体和人源化抗体保留了亲本鼠单抗的广谱HI活性和中和活性，动物治疗试验也表明了嵌合抗体和人源化抗体对H5N1禽流感病毒具有广谱治疗效果。人源化抗体37hAb在动物实验中显示出良好的保护效果，用Octet测定其亲和力为1.55×10-8M。 本实验是在人源化抗体37hAb的基础上，利用噬菌体展示技术对其进行亲和力成熟的改造 ...
霍永庭
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2010 目的构建pEGFP-N1/VEGF真核表达质粒,并进行鉴定。方法利用RT-PCR方法从组织中提取VEGF的基因片段,与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T/VEGF重组质粒,酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1/VEGF真核表达质粒,进行测序、酶切鉴定,表明质粒构建成功。结果本实验成功构建了pEGFP-N1/VEGF真核表达质粒。结论为进一步研究利用VEGF基因修饰骨组织工程骨,促进血管再生提供实验基础。
张明磊 +4 more
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蛋白酶体β5亚单位过表达对氧化环境下人晶状体上皮细胞的影响 [PDF]
, 2007 【目的】探讨蛋白酶体筇亚单位（PSMB5）基因过表达对氧化条件下晶状体上皮细胞的影响。【方法】构建重组质粒pcDNA3．1-PSMB5并将其转染人人晶状体上皮细胞株SRAO1／04中，形成稳定表达，同时设pcDNA3．1空载体为对照组。RT—PCR法及Western blot法分别检测PSMB5基因及蛋白的表达情况。H2O2分别作用PSMB5转染细胞及空载体转染细胞，MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】转染后用G418筛选3周后，获得PSMB5转染及空载体转染的G418抗性的细胞克隆 ...
刘奕志 +3 more
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真核表达质粒PcDNA3.1（+）-带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa）的构建及其在体内外细胞中的表达
Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建真核表达质粒PcDNA3.1（+）-带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa）并了解其在体内外真核细胞中的表达。方法将带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa）的逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）产物克隆至pcDNA3.1（+）真核表达载体上,经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后,以脂质体介导法转染体外培养的真核293T细胞及注射入鼠骨骼肌细胞中,了解其在体内外真核细胞中的表达情况。结果我们获取了包含带有白蛋白信号肽的Vasostatin（120-180aa ...
刘建巨 +6 more
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Study of Pelo deficiency mediated antiviral activity [PDF]
, 2012 果蝇是研究抗病毒天然免疫以及病毒与宿主相互作用的理想模型。我们以果蝇C病毒（DrosophilaCVirus，DCV）为病原体对已有的突变体果蝇库进行筛选，找到了一个对DCV感染更为抵抗的果蝇株并鉴定出其体内Pelo基因的表达量下降。通过基因敲除和表型回复实验，我们证实了Pelo基因的缺失的确可以使果蝇对DCV的感染更为抵抗。此外，DCV以及其他多种病毒的复制在Pelo基因敲除型果蝇中都变慢，说明Pelo基因缺陷可能介导了广谱的抗病毒免疫。 我们研究发现，Pelo并不参与目前已知的果蝇抗病毒免疫途径 ...
吴秀榕
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Zhongguo shiyan zhenduanxue, 2011 目的构建mB7-1真核表达载体并检测其在B16细胞中的瞬时表达情况。方法提取小鼠脾细胞mRNA,PCR法获得mB7-1片段,与pcDNA3连接,并进行酶切鉴定及测序。重组质粒经脂质体介导转染鼠B16细胞,检测基因表达情况。结果完成mB7-1-pcDNA3重组载体连接及鉴定,基因测序与Genebank一致,并转染至B16细胞,检测到基因表达。结论成功构建mB7-1-pcDNA3真核表达载体,获得mB7-1表达细胞系,为研究其抗瘤效应奠定了基础。
金洪娟, 王权, 所剑
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